材料
靶抗原： 在细胞抗原或蛋白质、多肽中表达
生理盐水
无血清培养基：仅用于细胞接种
弗氏完全佐剂(complete Freunds adjuvant, CFA)
实验动物： 无病原体大鼠、小鼠或仓鼠
弗氏不完全佐剂(incomplete Freunds adjuvant, IFA)
1~2ml玻璃注射器(Luer)-Lok 接头，消毒)
三通管
100ml 烧杯
20G 注射针头，已消毒
1. 将2X 106~5 X 107个细胞或1~50μg 将蛋白质或皮肤放入生理盐水中制备抗原。如果免疫原是细胞，在接种前在无血清培养基中清洗细胞3 第二次。在集成实验之前至少3d 准备免疫接种的实验动物(足以融合几次) 。
2. 使用1~2ml 玻璃注射器(Luer)-Lok 接头)吸收抗原，连接三通管。
3. CFA完全混合 打散结核分枝杆菌。用另一个玻璃注射器吸收等量的CFA，并连接带有抗原的注射器 。
4. 将抗原液反复注入CFA 然后取出，直到稠化混合，制成乳液。取50毫升 100毫升冷水 烧杯。在冷水表面挤出一滴乳液，以检测乳液是否稳定。如果乳液在水面上液滴，则进入步骤5 。如果液滴散开，将继续混合，直到稳定的乳液形成。
5. 将乳液移入一个注射器，移除另一个注射器和三通管。消毒20G 注射针安装在注射器上，以封闭乳液。
6. 麻醉大鼠 ，或者固定小鼠或仓鼠 。腹腔内注射乳液，剂量为:每只大鼠0. 5~1ml 、每只小鼠小于0.2ml 、仓鼠每只0. 2~0. 4ml 。将针头插入皮肤，在皮肤和腹膜壁之间穿过一段距离后，再插入腹膜腔。避免用力压迫注射器活塞，避免过度压力将针头与注射器分离，导致乳液喷溅。在拔出针头前旋转针头，以减少渗出。
7. 于10~ 14d 抗原二次免疫动物的剂量约相同。如果计划免疫3d 细胞融合实验后，利用水相溶解的游离抗原或休眠期的完整细胞进行免疫。如果细胞不立即融合，应用IFA 乳化抗原(不含结核分枝杆菌)免疫，不使用CFA 。
8 . 如有必要，可在第一次和第二次免疫后7~10d 使用ELISA （ 或用免疫沉淀法测定抗体滴度)。
