造成western-blot发光时，产生荧光淬灭的因素有哪些？

荧光淬灭Westernn Blot发光时常见的现象是，添加ECL发光液后，可以立即看到明显的亮光，但亮光很快就消失了。压片后，条带很弱，甚至没有条带。造成这种情况的原因可能如下：

1. 抗体浓度过高，局部HRP过多会迅速消耗底物，导致荧光信号过强，条带燃烧。抗体上的样量可以减少。

2. 抗体浓度太低，荧光信号太弱，第一次压片可能会得到很弱的条带，然后压片就没有条带了。

3. 操作时间过长，膜逐渐干燥。避免干膜。

4. 不良的实验习惯会污染设备或试剂。例如，锈蚀和意外污染的显影液和定影液会导致荧光淬灭，甚至直接导致无荧光；

5.ECL发光液的质量。ECL发光液的成分通常不稳定，除了由于接触空气而逐渐恢复过氧化物。建议选择发光稳定的试剂，如Enlight。