本方案(Chomczynski1993) RNAA可以同时从部分组织或细胞中提取 、DNA 和蛋白质。像它的前身(Chomczynski and Sacchi 1987) 同样，该方法涉及用异硫氰酸胍和苯酚的单相溶液裂解细胞。添加氯仿产生第二(有机)相，从而产生DNA 和蛋白质一起提取，而RNA留在水相清中。DNA在有机相中 与蛋白质分离，用乙醇和异丙醇按顺序沉淀。DNA从有机相中回收 是20kb 大小，适合PCR 反应模板。由于蛋白质暴露在胍中，变性主要用于免疫反应。从水相中沉淀异丙醇的RNA 寡核苷酸-纤维素柱可以通过色谱法进一步纯化/或用于Northernnn 杂交、反转录或RT-PCR 。
总RNA 产量因组织或细胞来源而异，但一般来说，组织的初始产量为4~7μg/mg ,细胞为5 ~ 10 mg/107 RNA提取的个细胞 的A260/A280 比值为1.8 ~ 2.0 。
材料
DEPC需要准备本方案中的所有试剂 处理的水。
试剂
细胞或组织
氯仿
DEPC 处理过的水
十五水拧柠檬酸二钠( 0.8mol/U） pH不需要调整 。
乙醇（75%)
异丙醇
液氮
单相裂解试剂
氯化钠( 1.2 mol/L)
磷酸盐缓冲盐水(PBS) ，冰冷(可选，见步骤1)仅适用于重悬和单层细胞生长。
RNA 沉淀溶液
SDS (20%, m/V) (可选，见步骤7 )
设备
用于测量260nm 吸光度的比色皿
组织匀浆器
低中速离心机和转子
DEPC 处理水清洗后的研究碗和杵，预冷
用聚丙烯带盖住的管道
65°C 水浴(可选，见步骤7)
方法
- 提取RNA准备细胞或组织样本 。
组织样品
在处理胰腺或肠道等富含蛋白质分解酶的组织时，最好先将组织切成小块( 100mg ) ，然后直接放入液氮中。快速冷冻的组织可以转移到－70°C 保存或立即用于提取RNA 。组织可以存储在里面－70°C 不影响RNA产量或完整性的数月。
冷冻和粉碎是不必要的。RNasee不丰富 该组织可迅速切成小块，并直接转移到添加适量溶液D （步骤l.iii ) 聚丙烯snap-cap 管中。
i 将所需组织分离，并立即将其放入液氮中。
ii 将约100mg 冷冻组织转移到含有液氮的研究碗中，用杵粉碎。在粉碎过程中添加液氮，以保持组织的冷冻状态。
iii . 将粉状组织转移到LML 聚丙烯snap冰冷单相裂解试剂-cap 管中。
iv Polytron在室温下使用 匀浆器匀浆组织15~30s 。
对于悬浮培养的哺乳动物细胞
i 通过200 ~ 1900g 离心5 ~ 10min 收获细胞。
ii 弃培养基，用1 ~ 2mL 无菌冷PBS 重悬细胞沉淀。
iii 放弃PBS，通过离心收集细胞， 按每106 加LML的个细胞 单相裂解试剂加入单相裂解试剂。
iv Polytron在室温下使用 均浆器均浆组织15 ~ 30s 。
单层哺乳动物细胞
i 弃用5~10ml的培养基 无菌冷PBS 一次漂洗细胞。
ii 抛弃PBS， 按一个90mm 将lml添加到培养皿中 单相裂解试剂裂解细胞加入单相裂解试剂的比例(每60mm) 培养皿0.7mL) 。
iii. 细胞裂解液转移到聚丙烯snapp上-cap 管中。
iv . Polytron在室温下使用 均浆器均浆组织15 ~ 30s 。
- 在室温下孵化5min， 完全分离核蛋白复合物。
- 每毫升单相裂解试剂添加0.2mL 氯仿。用于混合样品的剧烈振动或涡旋。
- 4°C 以12000r/min 离心15min， 分为两相的混合物。将上层水相转移到新的管道中。
DNA 将蛋白质提取到有机相中， RNA 留在水相中。DNA 蛋白质可以通过乙醇和异丙醇的顺序沉淀，并从有机相中回收
5 . RNA沉淀在水相中 : 对于每个初始毫升的单相裂解试剂，添加0.25 体积倍的异丙醇和0 .2 5 双体积沉淀RNA 溶液。完全混合后，在室温下放置10min 。
- 微型离心机4 °C 以最大速度离心10min 收集沉淀的RNA 。用75％乙醇洗涤沉淀两次，然后离心。用一次性吸头去除残留的乙醇。打开几分钟挥发乙醇，不要让沉淀完全干燥。
- 加入50~100mL DEPC 处理过的水， -70℃ 储存RNA 溶液。
加入0.5 % SDS, 然后加热到65℃ 有助于溶解沉淀。
8.估计RNA 的浓度。
