【实验原理】
真核生物的MRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。归根结底，真核生物的所有蛋白质都是MRNA的翻译产物。因此，高质量MRNA的分离和纯化是克隆基因和提高CDNA文库建设效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1个×10-5g RNA，理论上认为每克细胞可以分离5～10mg RNA。其中RRNA为75％～ 85％，tRNA占10％～16％，MRNA只占1%～5％，而且MRNA分子种类繁多，分子量不均匀，表达丰度也不同。
真核生物MRNA具有5端帽子结构(m7)的特征结构G）poly和3端(A)尾巴-绝大多数哺乳动物细胞的3端有20~300个腺苷酸组成的poly（A）poly通常用于尾巴（A ）该结构为真核MRNA分子的提取和纯化提供了极其方便的选择性标志，寡聚（dT）纤维素或寡聚（U）这就是琼脂糖亲合层分离纯化MRNA的理论基础。
MRNA分离纯化的一般原理是基于MRNA 3’ 多poly包含在末端(A)尾巴结构特征设计。当总RNA流经寡聚时（dT）(即oligo(dT)）在高盐缓冲液的作用下，纤维素柱被特别吸附在oligo中(dT)在纤维素柱上，MRNA可以在低盐浓度或蒸馏水中洗掉，经过两次oligoo(dT)纤维素柱，可获得较纯的MRNA。
目前常用的MRNA纯化方法有：
- （1）寡聚（dT）－纤维素柱层分析，即分离MRNA的标准方法；
- （2）寡聚（dT）－纤维素液相离心法，即用寡聚（dT）－纤维素直接添加到总纤维素中 在RNA溶液中，MRNA和寡聚（dT）－纤维素结合，离心收集寡聚（dT）－纤维素／MRNA复合物用洗脱液分离MRNA，然后离心去除寡聚物（dT）－纤维素；
- (3)其他方法:如寡聚（dT）－磁性球珠法等。
