该方案是一种含有dsRNA的方法 培养液浸泡果蝇S2 细胞诱导RNA 简单的干扰方法。与转染法相比，浸泡操作所需的步骤更少，因此可用于高通量RNA 干扰筛选。而且， 浸泡避免了转染试剂可能产生的毒性，但通过浸泡到果蝇S2 dsrna细胞转移与转染方法相比，效率较低。通过浸泡dsRNA 通过多次转dsRNA，很难抑制其表达的基因 抑制作用。本方案介绍的浸泡方案用于6孔板内培养的细胞。如果使用其他规格的多孔板、培养瓶或培养皿，细胞密度和试剂用量应根据培养孔的表面积进行转换 。
试剂
果蝇Schneder 2 ( S2 ) 细胞
dsRNA ( 1μg/μL)
胎牛血清热灭活(FBS )
Schneider ‘ s 果蝇培养液
gibco胎牛血清
设备
锥形离心管( 50mL )
免疫荧光、Western 印记，定量RT-PCR 或者Northernnnn 杂交设备
层流生物安全柜(II级）
体视显微镜
组织培养皿( 10cm )
组织培养箱( 25 °C) ，一定湿度
组织培训板(6 孔）
方法
用细胞浸泡制备
1. 用含有10％胎牛血清的Schneider ‘s 培养S2的果蝇培养液 细胞，细胞在25岁 °C 湿润培养箱生长至5 X106~ 10 X 106 个干细胞/mL 。
2. 室温下1000g 离心3min， 抛弃上清，将细胞重悬在无血清Schneider上s 果蝇培养液中， 密度为1 X 106 个细胞/mL 。
3 向6 在孔板的每个孔中加入LML 细胞悬液（1 X 106 个细胞）。
4 在25 °C 在潮湿的培养箱中培养细胞。
dsRNA 分析浸泡细胞和基因减少效果
5 在每个孔细胞中加入155 ~ 30μg dsRNA 。轻轻前后直线移动培养板。不要旋转，以免中间细胞脱落，影响细胞摄入DSRNA 的效果。
6 细胞在25 °C 在潮湿的培养箱中孵化30min 。
7 每孔加2mL 含有10％Schneider胎牛血清s 果蝇培养液。
8 细胞在25 °C 在湿培养箱中培养2 ~ 6 天。基因敲减效果分析： 通过免疫荧光和Western 印迹法 ，使用特异性识别目标蛋白的抗体来检测目标蛋白表达的减少量，并通过定量RT-PCR 或者Northernnnn 杂交检测目标MRNA 的减少量。
