包涵体的复性一直是生物制药的瓶颈，包涵体的处理一般包括细菌破碎、洗涤、溶解、复性和纯化等步骤。
一、表达包含体蛋白的表达
在平板电脑上选择单菌落，接种含有氨酞青霉素和卡那霉素抗性的5 ml 37.LB培养基 过夜培养℃，然后转移到100 ml LB 培养基中，37 ℃培养至A600 IPTG加入0.4~0.6时 最终浓度为0.5
mmol/L 诱导3.5 h。8000 r/min 离心5 min 收集细菌，加入10 ml 50 mmol/LTris-HCl，冰浴超声波破碎后，120000 r/min离心30 min收集沉淀。
二、洗涤包含体
在包含体中加入包含体洗涤液：50 mmol/L Tris—HCl，1 mmol/L EDTA，50 mmol/LNaCl，w=0．5％TritonX-100，pH 8．0；，37℃振荡洗涤1～2 h，然后8 000 r/min 离心15 min，收集沉淀。
三、包含体的溶解
加入适量洗涤后的包涵体(包涵体溶解液)：6 mol/L 尿素，50 mmol/L Tris—HCl，1 mmol/L EDTA，50mmol/L NaCl，10 mmol/L β-ME，pH 8．0(注：β-ME用时现加)，在磁力搅拌器上搅拌过夜，1万 r/min离心30 min，取上清即得包含涵体溶解液。
四、包含体的复性
目前常用的包含体复性方法有两种:1。稀释溶液，但液体量大，蛋白质稀释；2.透析、超滤或电渗透析去除变性剂。
1.稀释复性包含体
设置不同的复性条件：蛋白质浓度、尿素浓度、温度、氧化还原条件，添加ttiton X-100与环糊精的量、复性时间等，使变性溶解的包涵体稀释复性，复性一定时间后取样测量酶活性。
2.包含体的透析复性
包含体蛋白的复性将是8 mol/L 将尿素溶解的样品放入透析袋中，密封在复性液I(0.2 mol/L Tris-HCl；0.5 mol/L NaCl；5%甘油；5 μmol/L EDTA；pH8.5），4 ℃
透析12 h 然后转入复性液II(0.2) mol/L Tris-HCl；0.5 mol/L NaCl；）4 ℃ 透析12 h，12000 r/min 离心30 min，收集蛋白质浓度和活性测定。
复性前必须清楚蛋白质的性质：
1. 蛋白质预期的二级结构是什么？一般来说，beta sheet占蛋白质的大部分，更容易复性
2. 蛋白pI
3. 氨基酸组成，如cystine，是否有cystine
4. 有底物吗？假如有结合ligand等，加入后通常会有所帮助，
5. 一般尿素含有很高的杂质(暂时不记得什么名字了，如果楼主一定要回复我再找)，当达到8 M时杂质浓度也很高。有的实验室会先净化尿素，再溶解，有的直接试GuHCl
6. 复性通常是梯度稀释，或梯度透析，或者在柱上慢慢减少Urea，或者突然减少过快(你的复性液)。
7. 盐浓度能更高吗？一般可达0.5 M，如果有更好的盐(如果你更了解这种蛋白质的生化性质，你应该加一些其他盐)
8. Glycerol通常会有
9. 一般来说，Arginine或glycine
虽然复性成功的例子很多，但建议先尝试更换载体:pet32a、PGEX、Pmal可以促进蛋白质的可溶性，从包含体表达到可溶性表达。毕竟复性条件很难探索，成功的概率太小，浪费的时间太多。
