在Western 在Blot实验中，总蛋白浓度测定可能不准确；或者电泳前样品中蛋白质样品产生的样品之间的操作误差。所以一般的网络 内参设置需要Blot实验。
内参是内部参考(Internal Control)，Western 选择内参作为Blot实验的参考体系，对实验结果的分析具有很好的说明性。对于哺乳动物细胞的表达，内参一般是指由管家基因编码表达的蛋白质(Housekeeping Proteins)，它们在各种组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白质表达水平的变化时经常被用作参考。在Western Blot中使用的内参实际上是在WB过程中使用内参对应的抗体检测内参，以便在检测目的产物的同时检测内参的表达。由于各组织和细胞中内参的表达相对恒定，可以通过检测各样本中内参的数量来纠正上样误差，因此半定量结果更可信。此外，使用内参可作为空白对比，检测蛋白质转膜是否完整，整个Westernn Blot显色或发光系统是否正常。
在Western Blot 在实验中，除了蛋白质提取、蛋白质定量、等量蛋白质样品电泳、膜转移、靶蛋白抗体孵化、颜色显示等步骤外，还需要进行内部参数检测，以纠正蛋白质定量和样品过程中的实验误差，确保实验结果的准确性。通过测量每个样品中实际转移到膜上的内参的含量，检查您的整个western装置是否正常运行，包括您的配液、胶水、电泳和转移、抗性效率和颜色显示等. 内参的设置还可以检测样品的蛋白质含量是否相等，以纠正误差。具体的校正方法是将每个样品测量的目的蛋白质含量与样品的内参含量进行去除，获得每个样品目的蛋白的相对含量。然后对样品和样品进行比较。
严谨的Westernn Blot实验设计需要良好的参考系统，GAPDH是一种常用的蛋白质(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin等，是一些细胞的基本结构蛋白或管家蛋白，细胞表达稳定，表达水平高，在同类细胞上表达基本一致。
目的蛋白的分子量最好在5KD以上。因此，你应该知道你检测到的蛋白质的分子量来选择合适的内参！ Western Blot实验中内参的选择及其使用方法会直接影响实验结果的分析。
