本方案描述了ASO 转入果蝇S2 抑制miRNA的细胞 功能方法。通过检测miRNA靶蛋白水平或miRNA 3UTR靶基因 ASO可以检测到基因的活性 对miRNA 效果。本方案针对24 如果采用其他多孔板、培养瓶或不同直径的培养皿，应根据其表面积计算细胞密度和试剂体积 。
试剂
ASO （ 12.5μmol/L ) 和谐与/或与寡核苷酸无关
转染试剂
果蝇Schneder 2 ( S2 ) 细胞
胎牛血清热灭活( FBS )
Schneider’s 果蝇生长介质
设备
离心机
锥底离心管( 50mL )
免疫荧光和Western 印迹法所需的设备(步骤8)
层流生物安全柜(II 级）
体视显微镜
组织培养皿(10cm)
组织培养箱(25) °C), 一定湿度
组织培训板(24) 孔）
方法
制备转染所需的细胞
制备转染试剂
所有试验应包括试验组ASO 同一侧翼序列和同一长度的错配对照／或与寡核苷酸无关。所有体积均表示单个试验孔所需的体积，所有试验至少重复3次 次。多孔转染， 需配置10％在混合过程中补充溶液损失的剩余试剂。
1 向一个含24μL Schneider无血清s 在果蝇生长培养基的灭菌微量离心管中加入1μL(12.5pmol ) ASO实验组或对照组， 轻轻吹打移液管，搅拌均匀。
2 向一个含24μL 无血清果蝇Schneiders 在生长培养基的另一个灭菌微量离心管中加入1 μL 转染试剂， 轻轻吹打移液管，搅拌均匀。
3 将两管混合液室温放置5min 。
4 将ASO 将混合液轻轻加入转染试剂混合液中，将移液管轻轻吹打混合，在室温下孵化20min， 从而形成ASO－脂质复合体。
转染和miRNA 抑制效应分析
5. 细胞分别进入每个孔（ 来自步骤5) 中加入50μL 的ASO－脂质体感染介质。缓慢前后直线移动培养板与溶液混合，而不是环形移动，以避免中间细胞聚集，从而降低感染效率。
6 将细胞放入25 °C 在湿孵化器中培养1~ 8 天。
8 使用免疫荧光法和Western 对MiRNA靶基因的表达水平进行了分析。
