实验原理
在EDTA和SDS等去污剂的存在下，用蛋白酶K消化细胞，然后用酚提取，得到哺乳动构基因组DNA，DNA长度为100-150 kb，适用于构建基因组文库和基因组文库 Southern分析。
琼脂糖凝胶电泳技术通过本实验了解和掌握基因组DNA提取的原理和步骤，以及分子质量相对较高的DNA。
仪器、材料和试剂
(一)仪器
1 . 台式离心机
2 . 玻璃匀浆器
3 . 高压灭菌锅
4 . 恒温水浴锅
(二)材料
1．1.5mL微量离心管
2．微量取样器和吸头
3．无菌过滤器(一次性)
4．10 mL注射器
5．鼠肝
6．三羟甲基氨基甲烷(Tris)
七、十二烷基硫酸钠(SDS)
8．乙二胺四乙酸(EDTA)
9．蛋白酶K
10．RNA酶
11．DNA相对分子质量标准物，DNA／EcoRI HindⅢ相对分子质量标准物
(三)试剂
1、1.5 mol／L NaCl
2、0.5 mol／L Tris·HCI pH8.0
3．0.5 mol／L EDTA pH8.0
4．3 mol／L NaAc pH5.2
以上均为高压灭菌。
5．蛋白酶K 10mg／ml配置后，用一次性过滤器过滤-20 ℃ 保存
6 . 组织匀浆液 100mmol／LNaCI，10mmol／LTris·HCl(pH 8.0)，0.25mmol／LEDTA(pH8.0)
7．酶解液 200mmol／LNaCI，20mmol／L Tris·HCI(pH 8．O)，50mmol／LEDTA(PH 8.0)，200~g／ML蛋白酶K，1％SDS
8．RNA酶无DNA酵母 ： 将胰RNA酶溶解在10mmol中／L Tris.HCI(pH7.5)、15 mmol／L 在Nacl溶液中，浓度为l0mg／mL，100℃水浴处理15min，降解DNA酶，慢慢冷却到室温，-20℃保存
9．TE缓冲液 ：10mmol／LTris·HCl(pH8.0)，25 mmol／LEDTA(pH8.0)
10．平衡酚(pH8).0)：氧仿：异戊醇=25：24：1（体积比）
11．氧仿：异戊醇=24：1(体积比)
12．5xTBE 5.4gtris，2.75g硼酸 2mL 0.5mol／L EDTA(pH8.0)，加水到100毫升；
13．6x上样缓冲液 0.25％溴酚蓝，40％(W／V)蔗糖水溶液
14．λDNA／EcoRI ／HindⅢ 相对分为质量标准物片段(bP)21 227，5148，4973，4268，3530，2027，1904，1584，1315，947，831，564，125
实验步骤
与液氮条件相比，鼠肝DNA的产量和质量都有所下降。在整个操作过程中，应尽量避免DNA酶的污染，特别注意温和的动作，减少对DNA的机械损伤。
1、取0.2g鼠肝，用冷生理盐水洗3次，然后放入2.0ml匀浆中，用玻璃匀浆器匀浆至无明显组织块(冰浴操作时不要破碎细胞，可镜检查观察)。
2、将组织细胞移至1.5ml离心管，5万rpm离心30-60sec(低温尽可能操作)，弃上清。如果沉淀中有更多的血细胞，可以加入细胞体积的两倍均匀浆液进行清洗。
3、沉淀加0.8毫升无菌水迅速吹散，分为两管，再加入0.4毫升酵解液，翻转均匀(动作必须轻)55℃水浴处理12-18 h；
4、沉淀RNase的最终浓度为2000µg／mL，37℃水浴1 h；
5、加入等体积酚／氯仿／提取异戊醇一次(慢慢旋转混合，倾斜增加两相接触面)。4℃、10min、10000rpm离心；
6、有时，如果DNA含量过高，水相在下层，则在实验过程中应注意观察。用吸头移除含DNA的水相（注意不要吸出界面中的蛋白质沉淀），并添加体积氧仿／异戊醇，4℃、10 00rpm离心10rain (如果界面或水相中蛋白质含量较多，可重复1．6操作)。
7、用吸头小心吸出上层含DNA的水相，加1／Naaac体积10，小心混合均匀(要充分)，然后在每根管道中加入2.5倍体积的无水乙醇-20℃ 过夜。
8、12 离心000rpm19min，弃上清，75％冷乙醇洗涤一次，12000rpm离心15min室温干燥(不要太干，否则DNA不易溶解)，加入适量的TE缓冲液，储存在4℃，轻轻摇动溶解过夜，即可获得实验动物基因组DNA。
9、电泳鉴定DNA，由于基因组DNA相对分子质量大，使用0.3％琼脂糖凝胶电泳鉴定，先在底部铺1层％固化后，将支撑胶铺上0.3层％琼脂糖凝胶，插入梳子(梳子不能接触支撑胶)。取1.5µL溶解DNA、1µL上样缓冲液和35µl无菌水混合均匀后，小心取样(DNA可在另一孔中相对分为质量标准)，观察基因组DNA大小，用溴化乙锭染色观察结果。
[注意事项]
1、尽量在低温下进行操作，避免DNA降解。
2、琼脂糖凝胶脆弱，应小心操作。
3、提取的基因组DNA应为单条带，DNA降解可形成弥散带型。
