可能的原因和相应的解决方案如下:
1.引物用量过大,引物特异性不高。引物的使用应改变或减少。
2.循环次数过多。适当增加模板量,减少循环次数。
3.酶消耗量高或酶质量差,应降低酶消耗量或更换另一源酶。
4.退火温度低,退火和延伸时间长。应提高退火温度,减少变性和延伸时间,也可采用两种温度 pcr 扩增。以 2 梯度设计为梯度 PCR 退火温度的反应优化。
5.样品处理不当。
6.Mg2 浓度过高,因适当调整 Mg2 使用浓度。
7.若为 PCR试剂盒本身的质量也可能有问题。
可能的原因和相应的解决方案如下:
1.引物用量过大,引物特异性不高。引物的使用应改变或减少。
2.循环次数过多。适当增加模板量,减少循环次数。
3.酶消耗量高或酶质量差,应降低酶消耗量或更换另一源酶。
4.退火温度低,退火和延伸时间长。应提高退火温度,减少变性和延伸时间,也可采用两种温度 pcr 扩增。以 2 梯度设计为梯度 PCR 退火温度的反应优化。
5.样品处理不当。
6.Mg2 浓度过高,因适当调整 Mg2 使用浓度。
7.若为 PCR试剂盒本身的质量也可能有问题。