western-blot化学发光（ECL）出现高背景的原因是什么？

做Western Blot发光实验经常出现“背景过高”的问题。要找出“背景过高”的原因，首先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素会影响背景。
    影响发光的主要因素有：1.含HRP的抗体；2.发光试剂；3.与发光试剂反应的杂质，如含杂质的膜。其中，短时间内曝光引起的背景主要是由HRP抗体因素引起的。抗体浓度过高、洗涤不足、密封不足会导致膜上抗体的非特殊组合和背景制造；转移膜包括最终曝光时包裹的塑料薄膜，杂质也会产生背景，更容易发现和识别。
    值得注意的是，如果发光试剂不好，也会产生背景，这在长期曝光的情况下是显而易见的。有些人做过实验。在长期曝光（超过30分钟）下，高质量的发光试剂背景明显低于普通的发光试剂背景，图像更美观，结果更可靠。
    对于一些实验，如果实验结果应该是多条带，但有些带可以在短时间内检测，因为蛋白质量强，而另一些带需要长时间曝光才能检测。此时，主要影响因素是发光试剂，因为如果抗体量增加，普通发光试剂的背景也会相应增加，如果抗体量减少，会影响弱条带的检测，普通发光试剂较弱的条带不易检测，长期曝光也隐藏在背景中。此时，如果不知道有弱条带，实验结论实际上会受到发光试剂的影响。此时，如果你不知道有弱条带，实验结论实际上会受到发光试剂的影响。如果有长期曝光和低背景的发光试剂，结果将非常可靠。
    因此，在更好的抗体和实验过程中，使用优质的发光试剂，如英格恩生物的ECL发光液，可以减少背景，获得美观、真实、可靠的发光效果。