如何提高qPCR反应的灵敏度与特异性？

1. 模板RNA完整性好，无DNA污染。
2. 扩增反应抑制剂不应包含在RNA模板中。
3. RNasin被添加到反应系统中，以防止模板降解。
4. 使用适量的模板RNA，过多的模板会降低特异性，过少会导致条带扩展或条带过弱。
5. 如果模板中有二级结构，可以通过提高逆转录反应温度来提高扩展效果。
6. 在设计引物时，避免引物3端的互补序列，避免内部发卡结构的形成。
7. 可使用engren的qpcr试剂，选用化学修饰的热启动酶，具有更高的扩展效率和灵敏度