琼脂糖凝胶电泳拖尾了怎么办?

2024年11月27日 阅读量:151

跑过琼脂糖凝胶电泳的小伙伴,经常会遇到电泳拖尾的现象吗?相信很多人点头如捣蒜。提质粒拖尾,提DNA拖尾,甚至PCR拖尾,拖尾什么的最常见。即使验证了,关键是图片不好看,发文章太影响档次了。接下来,我将根据自己的经验告诉你琼脂糖凝胶电泳为什么会拖尾。如果有不足,希望大家多评论补充(三人行一定有我的老师)!!

为什么琼脂糖凝胶电泳会拖尾?

1.    PCR产品拖尾的因素有很多,总结为一个,就是非特异性扩增过多。原因可能是:
(1)    不纯模板:纯化模板
(2)    buffer不合适:更换buffer
(3)    低退火温度:适当提高退火温度
(4)    酶量过多:适量使用酶,或更换另一种酶
(5)    dNTP、Mg2 高浓度:适当降低DNTP和镁离子的浓度
(6)    循环次数过多:减少循环次数
(7)    模板量少或引物量过大:增加模板量,减少引物量

2.    这种现象在提质粒时经常发生,可能是样品浓度过高是的。这种情况很简单,只需稀释一下。

3.    拖尾也经常出现在基因组DNA中,最有可能的是提到DNA与蛋白质混合,蛋白质会拖动DNA的游泳。因此,必须注意提取基因的操作,减少蛋白质等杂质的出现。

4.    破碎或降解样品

5.    存在RNA:DNA前面的一块通常是未清除的RNA。经过纯化和RNAse处理后,它将消失

6.    电泳系统问题:观察你的marker是否也有拖尾现象,作为对比
(1)电泳缓冲液TAE或TBE污染:。建议更换缓冲液。
(2)样品漂移时,建议增加样品缓冲液的用量,并仔细加样。
(3)电压过高:适当降低电压
(4)根据核酸片段的大小,适当增加凝胶浓度。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb DNA片段所需的胶浓度为1.2-1.5%, DNA分子分离大于10kb所需的胶浓度为0.3-0.7%, 当DNA片段大小间于两者之间时,所需的胶浓度为0.8-1.0%。

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