western-blot化学发光时,出现非特异条带,该怎么办?

2024年11月27日 阅读量:78

杂带或非特异条带可能有以下原因:

1. 蛋白质上样量过大。可以减少蛋白质上样量。

2. 一抗是多克隆抗体,或者一抗和二抗浓度过高。可用单克隆抗体代替,或降低抗体浓度,缩短抗体孵化时间,优化一抗和二抗的使用浓度。

3. 洗膜不足。可增加洗膜次数和buffer用量,延长洗膜时间或Wash 最终浓度为0.05%的Twen-20添加到Buffer中。

4. 目的蛋白在体内有多种修饰形式,如乙酰化、甲基化、磷酸化、糖基化等。您可以查阅文献,以适当的方式去除蛋白质修饰,或选择适当的抗体。

5. 蛋白质降解的目的。重新准备蛋白质样品,并添加足够的蛋白酶抑制剂。

6. ECL发光试剂可用于发光质量问题,如Enlight发光液等。

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