一、 PCR反应系统的组成
1.PCR扩增缓冲液：
50mM KCl
10mM Tris HCl( pH8.0)
1.5mM MgCl2
2.寡核苷酸引物:DNA已知扩张 设计片段序列，使用 DNA合成仪合成。引物序列应位于DNA片段的保守区域，两个引物之间应注意不要有互补序列，单个引物应防止发夹结构。引物最好是20~24个核苷酸，至少不少于16个，浓度通常是50~100pmol。
三、脱氧核苷三磷酸：dNTP（dATP 、dCTP 、dGTP 和 dTTP）饱和浓度(每种) dNTP
浓度为200μmol） 下使用。
4. Taq DNA聚合酶。
5. 单、双链 DNA 或 RNA 它们都可以用作PCR样品。如果样品是RNA，则必须首先通过逆转录制MRNA 转录成CDNA ，然后进行扩增。
虽然 PCR 扩展可以使用极微量样品，甚至来自细胞的DNA，但也可以使用足够的DNA来确保反应的特异性。DNA模板可以是粗制品，但不能与任何蛋白酶、核酶混合Taq DNA 聚合酶抑制剂与聚合酶抑制剂相结合 DNA 的蛋白。
DNA 扩展反应系统一般为 25μl 或 50μl 按以下顺序添加成分后，扩大体积。
ddH202 12μl
10 X buffer 2.5μl
4 X dNTP 1μl
引物Ⅰ 1μl
引物Ⅱ 1μl
模板DNA 5μl
石蜡油 25μl
95℃变性10min后
加Taq DNA聚合酶 2.5μl(含0.25-1u酶)
二、PCR循环
第一个循环：95℃ 变性 10min后加Taqq DNA 聚合酶
后续循环：94℃ 变性 60s，50 ℃退火60s，72 ℃延伸90s
共25或35个循环
最后一个循环:72℃延伸10min，结束循环
每个循环应设置阳性对照和阴性对照。
除单轮扩增外，PCR扩增还包括双轮扩增，也称为半重叠扩增或半巢扩增和巢扩增。
