siRNA细胞转染操作步骤

以Entranster-R4000试剂为例，说说SiRNA转染步骤(24孔板)
1.细胞种植提前1天进行
贴壁细胞:将细胞提前一天种植在24孔板中，以转染时细胞的汇合度（Confluence）在30％转染前全培养基总量为0.45ml。
悬浮细胞：对数生长期的细胞数量为常规培养细胞数量的1/3进行转染实验。例如，常规培养的细胞数量为6×105，那么就用2×105细胞转染。
2.转染过程  
⑴取0.67ug(50pmol)的SiRNA，加入一定量的无血清稀释液，充分混合，制成RNA稀释液，最终体积为25μl。
注：建议使用OPTI无血清稀释剂-MEM、无血清DMEM或1640。
⑵取1ulentranster-R400，然后加入24ul无血清稀释液，充分混合，制成entranster-R4000稀释液，最终体积为25μl。室温静置5分钟。
⑶将Entranster-R4000稀释液与RNA稀释液充分混合(振荡器振荡或加样器吹吸10次以上)，室温静置15分钟。完成转染复合物制备。
⑷将50μl转染复合物滴加入0.45ml全培养基(含10%血清和抗生素)的细胞，前后移动培养皿，混合均匀。
注：采用含血清的全培养基对本试剂有助于提高转染效率。
⑸感染后6小时观察细胞状态。如果状态良好，则无需更换培养基，并继续培养24-96小时以获得结果。