如何制备HAT 选择培养基？

培养基可以用来有意识地从混合细胞中筛选特定性质的哺乳动物细胞。

材料

• 脾细胞与骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞(10: 1)
• 含10 ％胎牛血清 的RD 培养基
• 4X10^-5mol/L 氨基喋呤(A 液；用0. 1mol/L NaOH 配制成100 倍浓缩液）
• 1X10^-5mol/L 次黄嘌呤／ 1. 6 X 10^-3 mol/L 胸腺嘧啶脱氧核苷，双蒸水制备(HT液； 100 倍浓缩液）
• HAT 培养基： RD/10% FBS/ 1XA 液／ 1X HT 液
• 96 孔培养板

1. 以RD/ 10% FBS 骨髓瘤细胞浓度为1 X10⁶ 个／ml 。将0.01分别添加到悬液中 倍体积的A 液和HT 制成HAT的液体 培养基的选择。96. 孔板每孔0.1ml 细胞悬液，然后放在潮湿的37中°C, 5% CO₂ 培养箱内培养。
   
2. 每2 ～ 3 天空，从每个孔中吸出一半的培养液，然后补充新鲜的HAT 培养基液。
   
3. 21 天后，筛选杂交瘤细胞上清液，检测无目的抗体。
   
4. HAT逐渐撤出 用HT代替培养液 两周内用RD// 10% FBS 培养液。每隔3次 天用HT 用培养液代替培养液的一半，共4种 次；再每隔3 天用RD/ 10% FBS 替换一半的培养液。