如何做好DNA转染实验?

2024年12月04日 阅读量:58

在我看来,要做好质粒DNA细胞转染实验,应注意以下几点:

1, 质粒的大小和质量

线性化或超螺旋会影响感染结果:超螺旋颗粒的感染效率远高于线性DNA,尤其是瞬时感染。线性DNA转染的整合概率很高。过大的质粒转染会比较困难。毕竟,相对致密和较小的外源异物更容易被细胞吞噬。假如你的质粒只是比较大,而且没有经验,选择特别注明能转大质粒的转染试剂,成功的几率会更高。有些转染试剂还会提供一些促进DNA凝聚的成分,使DNA在形成转染复合物时更加致密,更容易转染。纯化质粒的质量也会影响转染效率,必须选择高质量的质粒。

2, 质粒DNA的浓度和量

由于质粒纯化不再是问题,初学者通常不关心甚至愿意添加更多的DNA,但需要注意的是,DNA量太少,虽然转染效率不高,但过多的DNA量也会降低转染效率。因此,预实验需要根据说明书的要求,按一定比例混合适量的质粒DNA和转染试剂。有些转染试剂需要更多的DNA,有些转染试剂只要很少的DNA效率高。

3, 选择转染试剂

确定质粒质量后,应考虑转染试剂的选择。目前大部分使用脂质体转染试剂,但毒性大,转染效率低。最好选择非脂质体转染试剂,如Entranster试剂。


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