1)优化条件:在某些情况下，不同的质粒、不同的细胞和定量的准确性会导致不在优化条件下的转染。在这种情况下，有必要优化质粒转染试剂的比例。此外，可以选择更合适的转染试剂，如Entranster试剂。
2)抑制剂:不要在DNA-转染试剂复合物培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素、透明质酸、硫酸葡聚糖或其它硫酸蛋白多糖。
3） 细胞状态及融合度：生长旺盛的细胞转染效果较好，转染时细胞密度应至少70%。
4)DNA的纯度和数量:确保质粒OD值A260/A280 在1.8~2.0之间。DNA量不宜过高，单独的DNA也会对细胞生长产生基本影响。
