大多数细胞系增殖最适合pH 为7. 4, 当培养液逐渐变酸或碱时，细胞的活力和增殖率会下降。培养液必须缓冲细胞代谢葡萄糖和谷氨酰胺产生的CO2 乳酸。人们曾经使用碳酸氢盐，HCO3–与空气中的CO一起2 碳酸氢盐的低pk共同构成缓冲系统a(pka=6. 1) 在pH7. 4 左右缓冲效率弱。PIPES等无毒缓冲剂(pka=6. 8), MOPS (pka= 7. Z), TES (N-tris [hydroxymethyl] methyl-Z-aminoethanesulfonic acid,pka=7. 5), HEPES(pka=7. 55) 在pH 6.0~8. 在0范围内有效，更常用于科研人员。浓度为10~25mmol//L HEPES 它是一种标准的无血清培养基缓冲系统，但它是额外的，不能取代碳酸氢盐和CO2 缓冲系统。常加酚红作为培养基中的指示剂，可提供肉眼可见的酸碱度评价指标，pH值 颜色由红变黄： pH7.4 时而红，pH7.0 时呈橙红色， pH6. 5 当pH时，它是黄色的 上升时变成浅紫色(pH7). 6) 紫红色(pH7). 8) 。当酚红从橙色变为黄色时，表明培养液乳酸堆积，应及时更换。
材料
- 不含NaHCO3或HEPES 粉状培养基
- HEPES
- NaHCO3
1. 用水溶解粉末培养基，轻轻搅拌。加入HEPES (分子质量238.3) ，最终浓度为15mmol///L, 搅拌直到溶解。将NaHCO按推荐浓度搅拌。3 加入基本营养液，搅拌备用。加入其他培养基成分，调整pH值 至7.4
2. 过滤除菌的培养基
3. 当温度完全培养基和温箱时，CO2 当浓度相平衡时，调整pH值
