单层细胞的培养

材料

• 装在冷冻培养瓶中的细胞： BS-C-1  、CV-1  、HuTK- 143B 或BHK-21 细胞
• 70% (VIV) 乙醇
• 培养基(表1)的开始和维护 ， 37°C
• PBS （可选）
• 胰蛋白酶／EDTA： 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶／0. 02% (m/V) EDTA, 37℃
• 25 cm²和150 cm²组织培养瓶
• 湿润的、37°C 、5% CO₂培养箱

表1 用于细胞系生长和维持的培养基^a

1. 在37°C 一个冷冻细胞的培养瓶在水浴中融化，用70个％乙醇消毒瓶口，用移液管将细胞移入25 cm² 组织培养瓶(5) ml 在初始培养基中，转动培养瓶，使细胞均匀分布，并将其放入5%的湿润中 CO₂培养箱中37°C 培养过夜。
   
2. 将起始培养基吸出，用维持培养基代替，将细胞放回培养箱，每天检查细胞的汇合度。
   
3. 当细胞长成单层时，用PBS吸出培养基 或胰蛋白酶／EDTA 清洗细胞一次，去除残留的血清．
   
4. 足够的37℃胰蛋白酶／EDTA 刚好覆盖单层细胞(如25层) cm² 用于组织培养瓶 0.3 ml) ，静置30~40 s, 摇动培养瓶，使细胞完全分离。
   
5. 加入1. 4 ml 为了分散细胞团块(这些细胞可以用来代代相传)，维持培养基，用吸管来回吹几次细胞悬液。
   
6. 取0.5 ml 将细胞悬液添加到新的150 cm2 组织培训瓶(含30个) ml 在培养基中，转动培养瓶，使细胞均匀分布，放入37℃ 的CO₂ 直到细胞汇合(约1)进入培养箱 周)，每隔一周约1周: 20 维持培养基中维持细胞的比例。