1.设计合成有效的SiRNA
RNAi的核心需要siRNA有效地将相应的MRNA结合起来。SiRNA的设计合成首先非常重要，最好的设计可以以最小的工作浓度达到令人满意的沉默效果，减少副作用的发生。SiRNA的设计可以通过检索优先考虑验证的SiRNA或多对SiRNA的设计。需要强调的是，需要同时设置阴性对照，以消除非特殊沉默和阳性对照，以确认整个实验系统的有效性。
2.合成SiRNA注重纯度和工作浓度
需要注意的是，SiRNA的合成必须选择高纯度的SiRNA。SiRNA的纯度直接关系到感染效率和沉默效率。SiRNA的工作浓度与SiRNA的设计、细胞类型和目标基因有关。建议对所有条件进行相关的预实验优化。
- 选择合适的细胞铺板密度
成功感染SiRNA的细胞会降低目标基因表达，但未成功感染的细胞不会受到影响。此时，感染效率和总细胞数量非常重要。一般来说，当细胞数量较少时，感染效率较高。由于自身毒性的影响，一些试剂在细胞数量过低时毒性明显，因此需要较高的细胞密度（汇合度）。顺便说一句，看看感染试剂的毒性，看它要求转染时的细胞密度。SiRNA的转移不同于DNA。DNA的转移是过度表达。一些死亡细胞对过度表达的蛋白质本身影响不大。然而，SiRNA的转移和死亡细胞的所有基因表达（包括特定目标基因）都会下降，这将与SiRNA引起的特定目标基因的表达一致，这将极大地影响实验结果。SiRNA的转移不同于DNA。DNA的转移是过度表达。一些死亡细胞对过度表达的蛋白质本身影响不大。然而，SiRNA的转移和死亡细胞的所有基因表达（包括特定目标基因）都会下降，这与SiRNA引起的特定目标基因的表达下降是一致的，这将极大地影响实验结果。选择低细胞毒性的转移试剂实际上非常重要。如果铺装密度高，一方面细胞的感染效果不理想，直接影响沉默效果和数据可靠性，另一方面，在48小时或更长时间后，过密的细胞会影响细胞状态，从而影响实验结果。
4.选择合适的SiRNA转染试剂
RNAI实验成功的另一个关键是选择合适的SIRNA转染试剂。由于细胞毒性对siRNA实验有很大的影响，可以直接影响实验结论和结果，因此必须选择低毒性转移试剂，看看转移试剂毒性是否低，有一个简单的方法，看看转移过程和要求，如细胞密度越大，毒性越大，如转移复合物允许和细胞孵化时间越短，毒性越大。除了毒性低，最好操作简单。越简单越好。例如，一些感染试剂要求在感染前更换无血清培养基或低血清培养基，感染后应有血清培养基。事实上，由于培养条件的频繁变化，可能会影响细胞表达模式，也会影响后续的MRNA和蛋白质分析，最终影响实验的可靠性。
EntransterTM-R SiRNA专用转染试剂，采用先进的纳米聚合物成分，细胞毒性很低，转染时细胞密度可低至20％，同时，可以有血清和抗生素感染。感染后无需换液。感染效率高，细胞毒性小，节省时间、精力和试剂。目前，它被许多著名的实验室选择。这是一个优秀的SiRNA转染试剂。
