细胞铺板密度对于siRNA转染为什么很重要?

2023年05月14日 阅读量:86

RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染SiRNA的细胞会降低目标基因表达,但未成功转染的细胞不会受到影响。此时,转染效率和总细胞数量非常重要。一般来说,当细胞数量较少时,转染效率较高。由于自身毒性的影响,一些试剂在细胞数量过低时毒性明显,因此,它需要更高的细胞密度(汇合度)。顺便说一句,看看一种转染试剂的毒性,看看它需要转染时的细胞密度。SiRNA的转移不同于DNA。DNA的转移是过度表达。一些死亡细胞对过度表达的蛋白质本身影响不大。然而,SiRNA的转移和死亡细胞的所有基因表达(包括特定目标基因)都会下降,这将与SiRNA引起的特定目标基因的表达一致,这将极大地影响实验结果。SiRNA的转移不同于DNA。DNA的转移是过度表达。一些死亡细胞对过度表达的蛋白质本身影响不大。然而,SiRNA的转移和死亡细胞的所有基因表达(包括特定目标基因)都会下降,这与SiRNA引起的特定目标基因的表达下降是一致的,这将极大地影响实验结果。选择低细胞毒性的转移试剂实际上非常重要。

由于SiRNA沉默及时性的影响,QRT-pcr检测只能在感染后48小时进行,蛋白质检测只能在感染后48-72小时进行。如果铺装密度高,一方面细胞的感染效果不理想,直接影响沉默效果和数据可靠性,另一方面,在48小时或更长时间后,过密的细胞会影响细胞状态,从而影响实验结果。

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