随着细胞培养技术的不断进步，尽管正常细胞难以培养和存活，但研究人员仍在研究各种正常细胞的培养方法。到目前为止，体内几乎所有的组织细胞都能在体外成功培养。越来越多的研究工作可以应用体外培养的正常细胞作为模型。Raff是神经胶质细胞最早成功培养的 等完成。1990年开始培养视神经胶质细胞 多年来，多个实验室成功培养。视神经胶质细胞参与各种眼病的发生和发展。体外可传代培养视神经胶质细胞， 并具有相应的功能。该细胞可用于其生物学的基础研究和临床研究，作为探索视神经发病机制和治疗措施的基础，也可作为表达神经胶质细胞特异蛋白、因子等生物产品的工具。星状胶质细胞周围的视神经在各种眼病的发生中起着重要作用。在研究药物作用机制和未来筛选新药方面，利用体外培养的视神经星状胶质细胞具有重要意义。
(一)材料和设备
1. 材料4~7d 新生Wistar 大鼠。
2. 0.25试剂培养液、胎牛血清％胰蛋白酶／0.04％胶原酶、消化液、1000μg/ml 多聚赖氨酸，0.05％胰蛋白酶／0.02�TA 消化液。
3. 设备培养皿、移液器、枪头、盖玻片、细胞计数板、离心管、超净工作台、CO2 培养箱、倒置显微镜、离心机、解剖显微镜。
(二)试剂配制
1. L– 多聚赖氨酸(0.1)mg/ml) 用于包装培养皿。拿L－多聚赖氨酸10mg 加到100ml 0.01mol/L PBS (pH 7.4) 0.22中溶解并使用μm 微孔滤清器除菌。
2. 0.05％胰蛋白酶／0.02�TA 消化液
(1) 取0.5g 将胰蛋白酶放入玛瑙研究碗中，先放入少量D-Hanks 研磨溶液20min 以上，再溶于450ml D-Hanks 溶液中。
(2) 在450ml D-Hanks 在溶液中加入0.2g EDTA (乙二胺四乙酸)在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH搅拌 调整溶液的pH值 至8.0, 于37°C 溶解在水浴中。
(3) 将（1）、(2)混合，使用D-Hanks 溶液定容到1L (pH 8.0) ，并用0.22μm微孔滤清器过滤除菌分装，－20℃ 保存备用。
请注意，必须添加NaoH pH溶液 调至接近8.0 时， EDTA 能完全溶解。
3. 0.25％胰蛋白酶消化液 取0.25g 玛瑙研钵中先放少量D胰蛋白酶-Hanks 研磨溶液20min 以上，然后使用D-Hanks 溶液定制到100毫升 ，并用0.22μm微孔滤清器过滤除菌。
4. 0.04％胶原酶消化液取40毫克 溶于100毫升的胶原酶 D-Hanks 0.2222μm 微孔滤清器过滤除菌。
(三)操作步骤
1 ．细胞分离培养。视神经管在解剖显微镜下分离至视交叉后1 ~2mm, 切除视神经。
2. 用MEM-EBSS 含HEPES (0.02mol/L) 液洗2~3 二、在无菌培养皿中切碎。
3. 先用0.25等容积0.25％胰蛋白酶和终浓度为0.02％的胶原酶37°C 每分钟15min消化15min 000 转速离心10min， 重复2 次。
4. 再用0.05％胰蛋白酶/0.02�TA 消化液37°C 静态消化15min， 取出摇晃，然后继续消化15min， 以每分钟1 000 转速离心10min， 弃去上清液。
5. 加入含1.7％牛血清白蛋白，10％胎牛血清DMEM 培养液通过21G 针头(0.8mm) 6~7 二次。通过筛网，细胞悬液含20％胎牛血清DMEM 终止消化培养液。每分钟1 000 转速离心5min， 收集细胞。
6. 用含20％胎牛血消 、青霉素(100U///ml) 、链霉素(100μg/ml）DEME 培养液再次悬浮细胞，分别移入1000μg/ml 多聚赖氨酸或2％明胶包在培养皿中。
7. 置7% CO2 培养箱内，37°C 根据细胞贴壁的情况，在条件下培养， 1 周后换液。当细胞接近汇合时，使用传统的消化方法 1: 2 方式传代。
(四)细胞鉴定
神经胶纤维酸性蛋白质(glial fibrillar acid protein, GFAP) 细胞免疫组化鉴定显示星状细胞细胞中有棕色阳性产物， 细胞核不着色， 核膜清晰
(五)注意事项
1. 用L－ 多聚赖氨酸( 0.1mg/ml ) 包装培养板后， 干燥后，用D-Hanks溶液冲洗2 次再接种， 对细胞有毒。L－多聚赖氨酸( 0.1mg/ml ) 可回收利用。
2 . 其他 幼鼠比成年鼠更容易成功。
