转化细胞在软琼脂中的生长

恶性转化的细胞在许多方面与相应的正常细胞不同，主要区别在于它们失去了接触抑制生长、获得永生和在动物宿主体中形成肿瘤的能力。软琼脂培养可作为体外细胞转化和肿瘤发育的替代方法。

材料

• 2% (w/ v) 琼脂
• DMEM基础营养培养基 ，含24. 6 ％和20% (v/ v) 胎牛血清
• 单细胞悬液
• 12 孔培养板
• 15ml 聚碳酸锥形离心管 ，灭菌

1. 每组重复孔2. 5ml 的2 ％琼脂与9. 75ml 含24.6 ％将胎牛血清培养液混合制成含0的培养液. 375 ％琼脂、20 ％胎牛血清培养液各取2ml 分别注入5 支15ml 聚碳酸酷锥形离心管， 45°C 温浴。
   
   
2. 将管道分开，分别含20 % FBS, 终容积为o. 5ml 在培养基中加入50 、100 、200 、500 和1000 个细胞。再准备另一组试管进行重复培养。每个浓度细胞悬液和步骤1 琼脂混合，快速注入12 37.孔培养板°C 湿润的CO₂ 培养箱孵化，直到细胞集落生长。
   
   
3. 倒置相差显微镜计数5 次倍增后至少有3次 2 计算个细胞的集落形成率(形成集落的贴壁细胞百分数)。