化学词典告诉你薄层色谱的操作步骤和注意事项。薄层色谱是快速分离和定性分析少量物质的重要实验技术，也用于跟踪反应过程。薄层色谱（TLC），将适当的固定相涂在玻璃板、塑料或铝基板上，形成均匀的薄层。
薄层色谱操作步骤
TLC分析通常需要4个步骤来完成制板、点样、展开和检测。
⑴制板
硅胶、氧化铝或其他吸附剂的薄层、样品的分离和检测均匀涂抹在一个平面支撑物(通常是玻璃)上。
一般选用表面光滑光滑的玻璃板，规格合适。常用的薄层板规格有：10cm×20cm、5cm×20cm、20cm×20cm等。取适量硅胶，加0.2％～0.5%羧甲基纤维素钠溶液（CMC-Na），搅拌均匀，制板。一般来说，10厘米×20cm玻璃板，3～5g硅胶/块；硅胶与羧甲基纤维素钠的比例一般为1：2～1：4。将制好的玻璃板放在水平台上，注意防尘。在空气中自然干燥后，在1l0℃的烤箱中烘烤0.5～lh，取出，冷却，放在紫外线灯(254nm)下检查，薄层板应无花斑、水印，方可备用。
⑵点样
点样采用微量进样器。点样前，先用铅笔在层析上距离末端lcm 轻轻画一条水平线，然后用毛细管吸收水平线上的样品，轻轻点击样品。如果您想重新点击样品，您必须等待前一个点样品残留溶剂挥发，以避免点样品点太大。一般斑点直径大于2mm，不超过5mm.底线距基线1～2．5cm，点间距约为lcm，样点与玻璃边缘之间的距离至少为lcm。为了防止边缘效应，薄层板的两侧可以刮去1～2cm，然后点样。
⑶展开
将点样的薄层板放入装有展开剂的展开槽中。由于毛细管的作用，展开溶剂在薄层板上缓慢前进。前进到一定距离后，取出薄层板，样品组分固定移动速度不同，相互分离。
① 展开室应预饱和。为了达到饱和效果，可以在房间里加入足够的展开剂；或者在墙上贴两个和房间一样高一样宽的滤纸条，一端浸泡在展开剂中，密封房间顶部的盖子。
② 展开剂一般是两种以上的互溶有机溶剂，临时新配为宜。
③ 薄层板点样后，待溶剂挥发后，再放入展开室展开。
④ 展开时应密闭，展距一般为8～15cm。将薄层板放入展开室时，展开剂不得超过样点。一般情况下，将展开剂浸入薄层下端的高度不得超过0.5cm。
⑤ 展开剂每次展开后都需要更换，不能重复使用。
⑥ 展开后的薄层板用适当的方法完全挥发溶剂，然后检查。
⑦ RF值一般控制在0.3～0.8.当RF值大或小时时时，流动相的比例应适当改变。
⑷ 斑点的检出
展开的薄层板干燥后，常用紫外线照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色成分，使用显色剂时，显色剂喷洒应均匀，量应适中。紫外线灯的功率越大，暗室越暗，检测效果越好。
分离后，化合物在薄层板上的位置用比移值(RF值)表示。化合物的RF值是化合物斑点中心与溶剂前沿与原点之间的距离。
薄层色谱的注意事项
(1)一些溶剂，如氯仿或乙醚，经常掺入痕量乙醇作为保护剂，使用前应蒸馏去除，否则无法获得重复的色谱图。
（2）储存在不同环境中的不同溶剂的水含量差异很大，特别是许多溶剂是亲水的，会受到环境湿度的影响，最好储存在干燥器中。
（3）为了防止溶剂在储存过程中受到污染。其中一些会自动氧化，而另一些会被空气污染物污染，因为储存密封不良。污染程度与储存条件和储存时间有关。
(4)移动相与镕质的相互作用会改变色谱行为，溶剂中的杂质有时会参与这种相互作用。
(5)混合移动相中的各种溶剂也会相互作用。如果溶剂不纯或每批混合溶剂组成不同，混合物的性质可能会发生变化。
(6)混合溶剂在扩展过程中可能会分层，通常在弱溶剂和少量强溶剂混合时会迟到。强溶剂在一段初期优先吸附，所以前沿是100%的弱溶剂。这种吸附剂被强溶剂饱和后，会有两个由混合溶剂组成的前沿。
