离子交换色谱是什么?它是指离子交换色谱中固定相中的一些带电荷的基团, 这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。如果流相中有其他带相反电荷的离子,这些离子将根据质量作用定律与固定相上的反离子交换。
离子交换色谱展开剂的类型
①pH=3.0~pH8.0的0.05mol/L磷酸缓冲液或pH3.4的2mol/L氯化钠溶液等各种离子强度的缓冲溶液;
②0.1等盐溶液~2.0mol/L氯化钠溶液;
③蒸馏水;
④在甲醇、四氢呋喃、乙腈等各种展开剂中加入少量有机溶剂。
固定相在离子交换色谱中的要求
离子交换树脂分为阳离子交换树脂和阴离子交换树脂两类。离子交换树脂的树脂核是由苯乙烯通过二乙烯基苯链聚合而成的。离子交换树脂中二乙烯基苯的重量百分比称为“交联度”。网眼的大小可以反映树脂的交联度。树脂中的孔越小,大分子物质就不容易进入树脂颗粒。比如分离氨基酸或小分子肽(二肽或三肽),树脂交联度8%为宜;对于分子量较大的肽,应选择2%~4%交联度小的树脂是合适的。一般来说,只要不影响分离的完成,就更适合使用交联度高的树脂。由于交联度高,网眼小,组成紧密,性质稳定,不易损坏,使用寿命长。但由于网眼小,分子小的离子可以进入,分子大的离子不能进入,即不能交换,因此交换容量小,选择性强。
流动相在离子交换色谱中的要求
离子交换色谱展开剂的选择应基于分离化合物的酸碱性,各种缓冲液或盐溶液可用作展开剂。根据分离化合物是酸还是碱、阴离子还是阳离子,选择展开剂的前提。为了更好地分离这些离子化合物,必须在点样前使用水或0.1mol/LLV化钠溶液在薄层板上展开一次,使离子交换薄层再生或激活。
由于水是一种优良的溶剂,具有电离性,大多数离子交换树脂在水溶液中进行色谱分离。有时使用水/甲醇混合溶剂,因为在水相展开剂中加入少量能与水混合的有机溶剂,可以增加样品成分的溶解度,改变溶剂的分离选择性,减少某些成分的拖尾现象。缓冲液用于控制展开剂的pH值。例如,醋酸、柠檬酸和磷酸缓冲液常用于阳离子交换树脂;氨水、吡啶等缓冲液用于阴离子交换树脂。此外,展开剂的离子浓度也可以通过添加一些盐溶液来调节。

