Western blot洗液TBST是实验室常用的配制液,TBST的配方基本相残。配方中的一种成分是Twen-20,一种黄色或琥珀色的油性液体,有特殊的气味和微弱的苦味。当用移液枪吸收时,会有一种滞后感。为什么在Westernn? 在blot洗液TBST中加入这样的试剂,Tween-20在Western在Western blot 中间发挥了什么作用?
Tween-20
首先,了解什么是Tween-20。Tween-20也写Twenen Polyethylenenenene,又称Polyethenenene glycol sorbitan monolaurate,中文称为吐温-20或吐温20。Tween-20是黄色或琥珀色的油性液体,有特殊的气味和微弱的苦味。分子中含有较多的亲水性基团,可与水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇、乙二醇、棉油等混溶。非离子性除垢剂是常用的。
Tween-20的应用
Tween-20是一种非离子表面活性剂。用于水包油乳化剂、溶剂、扩散剂、稳定剂、润滑剂和抗静电剂。挥发油、脂肪酸酯、醇、酮和卤化物分离分析气相色谱固定液(最高使用温度120℃)。
Tween-20在Western blot 中的作用?
Western 在blot的操作过程中,大部分都使用TBST洗液,而且还是封闭的,一抗二抗孵化这一关键步骤。Tween-20通常用作非离子表面活性剂、BSA的功能相似,主要是封闭膜上蛋白质的非结合点,以减少背景,增强抗体的特异性结合。理想的封闭剂应封闭膜上所有未结合位点的靶蛋白,不结合靶蛋白的表面,也不与抗体或检测试剂交叉反应。如果脱脂牛奶的封闭效果不好,可以提高吐温浓度。
WB洗液中的吐温与BSA相同,可以保护抗原抗体蛋白。同时,由于它是表面活性剂(加入亲水环氧乙烷基团后的化合物),可以减少抗体对抗原的非特异性作用,用于洗脱未结合的抗体,减少非特异性结合。Tween-当我们使用TBST时,Tween-20的用量是0.5ml/L,不加SDS。

