色谱
与DNA 和RNA 同样,蛋白质可以常规分离,也可以用色谱法分离。主要的色谱法是凝胶过滤
离子交换层分析和亲和层分析。
1. 凝胶过滤,根据分子的大小分离物质。
工作原理:固定相中有许多孔,只有较小的分子才能进入。
填料:葡聚糖(交联右旋糖苷)、Sephacryl (丙烯基葡聚糖和N, N-亚甲双丙烯酰胺交联共聚物)、
琼脂糖。
实例:用G50 柱去除切口平移反应中未参与反应的核苷酸
2. 基于物质的电荷特性分离的离子交换。
工作原理:通过电荷将蛋白质或其它带电物质连接到固定相上,用高离子强度的缓冲液冲走。
柱子的填充物可以是阴离子、阳离子或两者。
填料: DEAE 纤维素,虚张声势(amberlite) 、Dowex 、琼脂糖CM。
例子:在DEAE DNA薄层分离凝胶电泳 样品。
3. 基于物质的自然结合,亲和分析物质分离。
工作原理:分子纯化具有专一性,可通过固定相上的配体可逆吸附。
填料:寡聚核苷酸(dT) 纤维素、生物素、肝素。
例子:抗体和蛋白质 A 的结合。
注意:许多层析填料在使用前都需要浸泡溶胀,否则就不能有效地工作,有的还需要在缓冲液中放置过夜。

