什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?

2023年07月25日 阅读量:119

实验凝胶迁移或电泳迁移率(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)它是一种研究DNA结合蛋白及其相关DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。该技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白与特定RNA序列的相互作用。

在非变性聚丙烯凝胶电泳中,将纯化的蛋白质与细胞粗提液和标有32P同位素的DNA或RNA探针一起保温,分离复合物和非组合探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非组合探针移动得慢。根据研究结合蛋白质的不同,同位素标记的探针可以是双链或单链。当检测到DNA结合蛋白时,如转录调节因子,可以使用纯化蛋白、部分纯化蛋白或核细胞提取物。根据目的RNA结合蛋白的位置,在检测RNA结合蛋白时,可以使用纯化或部分纯化蛋白,也可以使用核或细胞细胞提取物。DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异)用于竞争实验中的蛋白质组合序列, DNA或RNA结合蛋白的特异性与其他非相关片段(非特异性)相结合。在竞争特异和非特异片段的存在下,根据复合物的特性和强度来确定特异组合。

实验凝胶迁移或电泳迁移率(EMSA)(1)研究DNA结合蛋白及其相关DNA结合序列的相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)研究RNA结合蛋白与特定RNA序列的相互作用。

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