离心的种类和原理

2023年07月26日 阅读量:165

主要有两种离心方法:制备型(用于分离某些颗粒)和分析型(用于了解分离颗粒的物理性质)。

大多数分子或细胞生物实验室决定的离心机属于制备离心机,而大多数常规制备离心机为差速离心机。

g 力和每分钟旋转次数(rpm) 大略值:取决于所使用的离心机型号和转子。

差速离心(沉淀)

原理:样品以一定速度离心,分为上清部分和沉淀部分。样品根据不同的沉降速度进行分离。在一定的离心力下,沉降速度与颗粒大小、颗粒和液体密度成比例。

缺点:沉淀块是所有沉淀成分的混合物,有些成分不是你想要的。

转子:角式转子,外摆桶式转子。

例如:从培养基中沉淀细菌或细胞,收集沉淀的DNA 。

图一 差速离心

密度梯度离心

  • 带离心的速率区

原理:分离浮力密度相似但形状或大小不同的颗粒。样品铺在蔗糖梯度或其他粘性介质梯度的顶部。

由于颗粒密度大于液体密度,颗粒物最终会沉降。因此,在颗粒分离并所有颗粒到达管底之前,应停止离心。

所用转子:外摆桶式或专门设计的区带转子/离心机。

例子:用15% – 40 % (W / V) 蔗糖梯度分离核糖体亚基。

  • 等密度梯度离心

原理:就像平衡密度梯度离心一样,利用浮力密度分离颗粒分子。样品与氯化锶等梯度介质混合,产生与颗粒平均密度相同的密度。然后,离心的均质悬浮液在离心过程中形成梯度。(氯化锶略粘,难以用作预制梯度。)颗粒移动到相应的浮力密度,以停止沉降。

转子;外摆桶式、直立式、角式。角式和直立式是最好的, 由于沉降距离较短,离心时间可以缩短。对于细胞颗粒, 100 000 ~200 000 g 条件下需要18 ~ 72 小时。

例如,DNA用氯化绝梯度分离质粒 。

  • 平衡密度梯度离心

原理:利用浮力密度而不是沉降速度来分离颗粒。平衡密度梯度离心采用预形成梯度,而不是离心过程中自形成的梯度,实际上是等密度梯度离心的变化形式。样品在介质密度梯度中离心,密度高于细胞或颗粒密度, 直到形成平衡。平衡时,任何颗粒在密度梯度中移动到密度与周围溶液密度相当的点。

转子:外摆式、角式、直立式。

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