导致western Blot发光（ECL）“背景高”的原因有哪些？

Western Blot发光往往存在“背景过高”的问题，导致“背景过高”的原因有很多，主要有以下几个方面：

1. 抗体浓度过高，洗涤不足，会导致膜上抗体的非特殊组合，导致背景高。通过降低抗体稀释度，可以增加洗膜次数和buffer用量，或者在Wash 最终浓度0.05%的Twen-20添加到Buffer中进行改进。

2. 封闭不足会导致膜上抗体的非特殊组合，导致高背景。可通过4℃封闭过夜或增加封闭液中的蛋白质浓度来改善。

3. 使用不合适的封闭剂，可以尝试不同的封闭剂。

4. 过度曝光可以减少底物显色时间，缩短曝光时间。

5. 膜干在操作过程中。确保膜完全浸泡在buffer中，始终消除膜干。

6.发光液质量问题。可选用优质发光试剂，如英格恩生物Enlight等。