分离后, DNA 通常用于导入细胞和微生物,观察受体菌表面的变化或收获大量供体DNA 及其翻译产品。
原核细胞
转化是细菌与分离的DNA 重组后遗传基因发生变化。转化通常用于扩大克隆DNA, 另一个常见的用途是获得大量的特定蛋白质——转化表达载体的细菌会产生大量的DNA 编码的蛋白质。细菌转化主要有两种方法。
- 高浓度钙离子温育,细菌脂膜接受外源DNA, 步骤简单快捷,几分钟就能完成。
- 电转化。随着细菌物种甚至株系的变化,电转化可以获得更高的转化效率。
真核细胞
真核细胞的转化方法有几种,但通常具有物种和株系的特异性。这个过程被称为转移感染,它是转化和感染(病毒介导的基因传递被称为感染)的结合。
携带DNA的细胞可以通过表达一些报告基因来选择稳定的感染[它通常能抵抗抗抗生素或使用FACS 选择表达GFP 细胞(绿色荧光蛋白)]。细胞株是由表达细胞的单克隆培育而来的。
瞬时转染通常用于收集DNA 对细胞作用的短期信息。通常,瞬时感染的使用是有限的。目的DNA的细胞数量不确定(受感染效率影响),每个细胞中的DNA复制数量也不确定。此外,由于转染过程是有害的,而且很难控制,因此很难解释结果。对瞬时转染的分析常被用作对转染效果的预测,为稳定表达后的表型做好准备。
转染真核细胞的方法有很多,包括:
- 磷酸钙共沉淀法
- DEAE 右旋糖苷介导的转染
- 脂质体介导的转染
- 电转化
- 微注射
- 病毒介导的转导。腺病毒、逆转录病毒和SV40 通常用于介导DNA 进入细胞。
由于DNA 感染效率主要取决于细胞类型。为了避免浪费大量时间,必须在感染前调查细胞的感染方法,查阅文献、互联网或打电话询问操作步骤。
另外,载体也是决定转化转染结果的关键,在选择载体时要小心。

