丁醇抽提法浓缩核酸的步骤

2023年07月27日 阅读量:217

用仲丁醇( 2 -丁醇)或正丁醇( 1 - 当丁醇)和其他溶剂提取水溶液时,一些水分子会进入有机阶段,而核酸仍然留在水阶段。重复提取几次后,核酸溶液的体积可以显著减少。这种浓缩方法可以用来减少稀溶液的体积,使核酸通过乙醇沉淀很容易回收利用。

试剂

DNA 样品     异丁醇

方法

  1. 核酸溶液体积计算在2 5 °C 加入等量的异丙醇。两相轻微、完全混合。
  • 添加过多的异丙醇可能会导致去除所有水并沉淀核酸。如果发生这种情况,将水添加到有机阶段,直到水阶段(包括核酸分子)再次形成。
  1. 在室温下,将溶液放入微量离心机中,以最大转速离心20s, 或使用1600r//台式离心机min 下离心。上清(异丙醇)用微量移液器移除
  2. 重复步骤1 和2 直到你得到你想要的水相。
  • 因为异丙醇提取物不能去除盐, 盐的浓度会随着体积的减少而增加。核酸可通过柱层分析或乙醇沉淀转移到适当的缓冲液中。异丙醇在水中的最大溶解度为20℃溶解度的5% 、30 ℃溶解7.5% 。异丙醇中水的最大溶解度是20℃溶解5 % 、30℃溶解17.3 % 。
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