一、实验材料、试剂、仪器耗材:
MyoD1(MYF3)基因探测,人外周血中期染色体细胞标本
指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20等
恒温水浴、培养箱、染色缸、载玻片Nikon E-400荧光显微镜,盖玻片,封口膜200μL移液器、暗箱等
二、制备相关溶液
(1)20×SSC:175.3 g NaCl,88.2 g柠檬酸钠,加水至1 000 mL(用10 mol/L NaOH调pH 至7.0)。
(2)去离子甲酰胺(DF):将10 加入100g混合床离子交换树脂 在ml甲酰胺中。电磁搅拌30 min,使用Whatman l号滤纸过滤器。
(3)体积分数70%甲酰胺/2×SSC:35 5.ml甲酰胺 mL 20×SSC,10 mL水。
(4)甲酰胺/20%的体积分数×SSC:100 ml甲酰胺,20 mL 20×SSC,80 mL水。
(5)硫酸葡聚糖体积分数50%(DS):在65℃水浴中融化,4℃或-20℃保存。
(6)杂交液:8 μL体积分数25%DS,20 μL 20×SSC混合。(或40 μL体积分50% DS,20 μL 20×SSC,40 μL 上述混合液50ddh2o混合物 μL,与5 μL DF混合即成。最终浓度为体积分数的10% DS,2×SSC,体积分数50% DF。
(7)PI/antifade溶液
PI原液:溶液首先用双蒸水配置,浓度为100 μg/mL,取出1 mL,加39 ML双蒸水使最终浓度为2.5 μg/mL。
Antifade原液:用PBS缓冲液制备溶液,浓度为10 mg/mL,用0.5 mmolNaHCO3调pH值为8.0。取上述溶液1 mL,加9 混合均匀的ml甘油。
PI/antifade溶液:PI和antifade原液按体积比1:9比例完全混合,-20℃保存备用。
(8)DAPI/antifade溶液:用去离子水制备1毫升/mg DAPI储存液,按体积比1:300,用antifade溶液稀释成工作液。
(9)封闭液I:体积分数5% BSA 3 mL,20×SSC 1 mL,ddH2O 1mL,Twen20 5 μL混合。
(10)封闭液II:体积分数5% BSA 3mL,20×SSC 1mL,goat serum 250 μL,ddH2O 750 μL,Tween20 5 μL混合。
(11)荧光检测试剂稀释液:5%体积分数 BSA 1mL,20×SSC 1ml,ddH2O 3mL,Twen20 5μL混合。
(12)洗脱液:1000 mL 20×SSC,加水至500 mL,加Tweeen20 500 μL。

