以24孔板SiRNA转染为例，悬浮细胞的SiRNA转染操作步骤
1.提前1天细胞种植
悬浮细胞：对数生长期的细胞数量为常规培养细胞数量的1/3进行转染实验。例如，常规培养的细胞数量为6×105，那么就用2×105细胞转染。
2.转染过程
⑴取0.67ug(50pmol)的SiRNA，加入一定量的无血清稀释液，充分混合，制成RNA稀释液，最终体积为25μl。
注：建议使用OPTI无血清稀释剂-MEM、无血清DMEM或1640。
⑵取1ulentransterTM-R400，然后加入24ul无血清稀释液，充分混合，制成entransterTM-R4000稀释液，最终体积为25μl。室温静置5分钟。
⑶将Entranstertm-R4000稀释液与RNA稀释液充分混合(振荡器振荡或加样器吹吸10次以上)，室温静置15分钟。完成转染复合物的制备。
⑷将50μl转染复合物滴加入0.45ml全培养基(含10%血清和抗生素)的细胞，前后移动培养皿，混合均匀。
注：采用含血清的全培养基对本试剂有助于提高转染效率。
⑸感染后6小时观察细胞状态。如果状态良好，则无需更换培养基，并继续培养24-96小时以获得结果。
注意：1.SiRNA转染后，继续在MRNA水平培养24-72小时，在蛋白质水平培养24-96小时。MRNA转染后，24小时后根据需要得到结果。
2.在一些实验室中，由于血清和培养条件的差异，少量黑点沉淀可能出现在转染后镜下的培养基中。它是转染试剂和血清中蛋白质的结合产物，不影响转染结果和细胞状态，可通过液体交换去除。
