1.细胞密度
一般来说，当细胞密度达到60%时～80%的转染能达到较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。
2.细胞状态
这是非常关键的。大多数时候，传代次数过少或过多会导致细胞对传染试剂敏感性的变化。因此，为了提高传染效率、传染稳定性和降低细胞毒性，在不同的实验中，应尽量使用适度的传代细胞系统，并保持细胞传代次数的一致性。
此外，尽量选择无支原体污染的细胞。肉眼看不到支原体污染。可使用支原体检测试剂盒进行检测，以确保无支原体污染。
3.细胞种类
不同细胞类型的细胞在转染过程中需要不同的转染系统，不能用于所有类型细胞的转染实验。
4.DNA纯度
在制备高纯度DNA时，还需要去除DNA的内毒素。内毒素的存在会导致细胞毒性，严重影响感染效率。市场上有许多DNA纯化试剂盒可供选择。
5.转染试剂
脂质体试剂毒性大，尽量选择脂质体转染试剂，如Entranster试剂；此外，在大规模使用前，需要探索转染试剂和核酸的最佳比例。
