细胞DNA转染实验步骤

以Entranster-H4000、DNA转染试剂为例，简要说明DNA细胞转染实验步骤
1.细胞提前一天铺板
细胞在24孔板中提前一天种植，细胞密度为60％左右为宜。
2.转染过程
⑴将0.8μGDNA用25μ将无血清稀释液稀释，充分混合，制成DNA稀释液。
注：建议使用OPTI无血清稀释剂-MEM、无血清DMEM或1640。
⑵将2μl的Entranster-H4000用25μl无血清稀释液稀释，完全混合，制成Entranster-H4000稀释液。室温静置5分钟。
⑶在DNA稀释液中加入Entranster-H4000稀释液，充分混合(振荡器振荡或加样器吹吸10次以上)，室温静置15分钟。完成转染复合物的制备。
⑷在含细胞和完全培养基的培养容器中加入转染复合物，轻轻混合。
注意：①对于本试剂，全血清培养基的使用有助于提高转染效率。②抗生素可以在完全培养基中添加。
⑸培养4-6小时后更换培养基，继续培养24-48小时。
注意：①如果细胞没有毒性和其他不良情况，则无需在感染后4-6小时更换培养基。
重要提示
1.抗生素可在转染过程中添加，抗生素的添加是否不影响转染效率和毒性。
2.如果转染后需要用Trizol提取RNA，建议转染后6小时换液。