siRNA转染常见问题及解答

问:SiRNA导入细胞的方法和最佳方法是什么？
答:SiRNA导入细胞的方法有以下几种:化学转染技术、电穿孔技术、磷酸钙共沉淀技术、显微注射技术和载体导入技术。选择时，应根据实验条件考虑以下因素:细胞对转移方式的承受能力、细胞对病毒感染的易感性、细胞的生长特性等。化学转染技术是贴壁细胞最常用的方法，而电穿孔法对悬浮细胞有更好的效果。
问：哪种转染试剂效果好？
答:选择转染试剂时，一般要考虑特定的细胞株，而不是导入细胞的物质。脂质体试剂毒性很大。建议选择非脂质体转染试剂，如Entranster试剂。
问：如何筛选转染试剂？
答:好的转染试剂有以下特点:1、对SiRNA的转染率较高；2、对细胞的毒性较小。SiRNA在MRNA水平检测中的导入效果比用看家基因的SiRNA阳性对照检测更准确。
问:转染时发现很多细胞死亡，该怎么办？
答：感染后大多数细胞的死亡表明，感染条件需要进一步优化。在优化感染条件时，应考虑以下因素：感染试剂和细胞的独特条件。例如：SiRNA与感染试剂的比例、感染时间、细胞代数和细胞密度。
问:如何提高难转染细胞的转染效率？如何确定转染效率？
答：对于难转染细胞的转染，如何提高转染效率也是目前研究的一个技术问题。一般建议使用旋转方法，但由于旋转方法对细胞的损伤相对较大，该方法可能不是最好的。确定转染效率，常用的方法是使用荧光标记的siRNA，通过荧光显微镜，共焦显微镜，流动细胞仪检测方法。
问:转染后细胞死亡的原因是什么？如何优化转染条件？
答:转染后细胞死亡的原因有很多，如脂质体毒性、转染浓度过高、转染前细胞状态不佳等。，这可能导致转染后细胞死亡。在这种情况下，有必要适当优化转染条件；可以选择非脂质体的转染试剂，如Entranster试剂，细胞毒性小。此外，如果SiRNA的靶向基因对维持细胞生长非常重要，细胞死亡可能是由基因干扰引起的。如果细胞死亡影响检测，检测时间可以适当调整。优化实验条件，包括细胞密度调节、转染浓度、检测时间等。