成纤维细胞作为体外最成功的正常细胞，应用广泛。然而，由于其传代寿命有限，通常用于细胞衰老的研究。在肿瘤研究中，它通常被用作正常细胞对照，以研究细胞恶性转化的条件和影响因素。另外， 也常用于检测药物毒性。成纤维细胞在体外培养， 也用于染色体异常疾病的筛选、先天性代谢遗传疾病的细胞化学和生物化学检测和鉴定等疾病的诊断。
(一)材料和设备
1.设备 超净工作台、离心机、CO2培养箱、－10℃冰箱、－20°C冰箱。
2. 无菌材料 大培养皿，青霉素瓶，50毫升 离心管、刻度管、弯头管、T25 培养瓶、手术剪刀、镊子、细胞筛(1000 目）、乙醇棉球消毒，流产胚胎，高糖DMEM 培养液、胎牛血清、青／链霉素、D-Hanks 溶液、0.25％胰蛋白酶／0.03�TA 消化液。
(二)操作步骤
1.消化法
(1)流产胚胎引出后，应在4℃下保存并尽快运输至实验室。
(2)将胚胎放入大平皿中，用酒精棉球擦拭消毒胚胎。
(3)用手术镊子和剪刀，从胚胎腹部切口向上扩张，切断肋骨，取出肺部，取出外膜后，使用D-Hanks 洗涤溶液(含双倍双抗)3~5 第二，组织呈灰白色。
(4)将组织切割至1mm3, 移入青霉素小瓶，加入少星D-Hanks 溶液混合均匀，用弯头吸管将切割的组织移到50毫升 在离心管中加D-Hanks 清洗溶液，然后每分钟清洗1次 000 转速离心6min 。
(5)弃上清，加15ml 的0.25％胰蛋白酶／0.03�TA 消化液在千室温下消化15min， 然后用吸管混合，静置几秒钟，待组织块沉淀后放弃上清液。
(6)重新添加新鲜消化液15ml 消化10~15min， 混合后，将上清液(此时悬液中已消化的细胞)移入另一个离心管，含20% 血清DMEM 培养液终止消化，然后在原离心管中加入10~ 15ml 消化液消化，重复3~4 次。
(7)将消化后收集的细胞悬液混合，通过细胞筛。
(8)筛分后的细胞悬液每分钟移入离心管1 000 转速离心6min， 弃去上清液，含20种％胎牛血清DMEM 将培养液混合均匀，此时可在计数板上计数，然后将细胞悬液按每瓶6~8ml （含细胞量1 x 106 个）移入T25 在培养瓶中，37岁°C 、5% CO2在培养箱中培养。第二天，观察细胞贴壁，弃旧液，使用D-Hanks 溶液清洗后，更换新鲜培养液37℃ 、5% CO2继续在培养箱中培养。
（9） 在原始培养的第三天，细胞生长到80%~90% 汇合时，进行第一次传代。以后每3~4d。 按常规1代一次 : 3 操作传代方法。
2. 组织块贴壁法
(1)流产胚胎引出后，4℃保存并运输至实验室。
(2)将胚胎放入大培养皿中，用乙醇棉球擦拭消毒胚胎。
(3)手术镊子、剪刀， 从胚胎腹部切口，向上扩张，切断肋骨，取出肺部，去除外膜，使用D-Hanks 洗涤溶液(含双倍双抗)3~5 第二，组织呈灰白色。
(4)将组织切割至1mm3, 将青霉素瓶移入，然后吸入D-Hanks 溶液清洗2~3 次。
（5） 将组织块移入T25 培养瓶，用弯头吸管将组织块轻轻剥离成单个，均匀贴在瓶壁上，然后将贴有组织块的培养瓶移入培养箱，翻转倒置4~6h， 至组织块贴牢。
(6)加入6~8ml 含20％胎牛血清DMEM 37℃培养液 、5% CO2 培养
箱中培养。
（7）3~7d 镜下观察后，组织块周围会有细胞生长，细胞生长后可以看到“生长晕”。
（8） 在原始培养过程中，应确保每3d 换1 细胞生长到7~10d 可以第一次传代。以后每3~4d。 传代1 次，按常规1 : 3 操作传代方法。
（三）小结
体外培养的皮肤最常用于成纤维细胞和包皮成纤维细胞。前者可以在门诊进行活检。注意去除脂肪组织和结缔组织。后者可以通过手术切除组织。成纤维细胞的体外培养可以代替20~50 次数。80%~900%的细胞。％汇合时需要代代相传。避免接触抑制和自发转化。
