警惕！细胞转染效率低下的几个陷阱

细胞转染是细胞生物学和分子生物学中常用的技术手段。但转染效率低是实验者经常遇到的问题，尤其是原代细胞转染，更难转染。现在分享几个细胞转染实验中常见的陷阱，希望实验者能注意到。
1.准备不足
在进行细胞转染时，应在正式实验前进行更多的预试验，以优化转染条件。优化转染条件包括：转染试剂量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵化时间等。
2.细胞污染
细胞污染也是细胞死亡和转染效率低下的主要原因。首先，用于转染细胞的质粒必须是无菌的。目前，市场上的一般质粒提取试剂盒不能绝对无菌。分享一个小技巧：提取质粒或最后一步，使用75％乙醇沉淀，从而消除细菌。
3.质粒质量问题
转染质粒的数量首先要保证，一般为2μg以上。质粒纯度不足或含有细菌LPS或其他对细胞有毒的物质也会影响感染效率。此时，应纯化和浓缩质粒。
4.细胞状态不好
细胞状态不佳会导致感染效率低下。一般来说，感染细胞应处于对数生长期。如果是贴壁细胞，贴壁率应为70-80%；如果是悬浮细胞，应该是6×105个/孔(24孔板)，一般在感染前一天换液，感染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。
5.转染试剂问题
脂质体试剂毒性大，容易导致细胞死亡和转染效率低下。非脂质体转染试剂，如Entranster试剂，可以选择。