一、细胞培养所需的培养液
在细胞的研究和利用过程中，最重要的是为细胞提供最合适的生长条件，并在细胞培养开始时保持群体状态。这需要一致的培养条件，几乎坚持细节和常规，细胞培养，试剂昂贵、耗时、费力，不能随意进行。
只有在最适宜的生长条件下，细胞才能保持正常的核型和功能。如果培养条件降低，则意味着有染色体重排或突变株细胞。某些营养物质或生长因子剂量不足或细胞高密度培养时间过长，不是最适合生长的条件。
二、平衡盐溶液
平衡盐溶液可以维持渗透压，调节酸碱平衡，并提供细胞生存所需的能量和无机离子成分。最常用于洗涤组织或细胞的基本溶液是Hanks 溶液和磷酸缓冲盐溶液(PBS) 。
三、血清
血清营养丰富，包括多种生长因子和许多未知成分。动物细胞的生长取决于血清。血清有很多种，包括胎牛血清、小牛血清、马血清、兔血清、人血清等。
选择一批最适合细胞的血清是非常重要的，如果可能的话，购买来源公司应该保留足够的数量供实验使用。这可以避免反复试用，以选择最适合血清的成本。血清的质量可以通过检测细胞的克隆形成率来衡量。取对数生长期细胞完全消化后，密度低(直径6mm 在平皿中加入约10个3接种5~6个细胞) 个平皿， 在其中一个平皿中加入30个％为了确定高浓度血清的细胞毒作用，血清培养液。7~ 10d 之后，当肉眼可见克隆时，将培养液倒出， 2％亚甲蓝染色2~5min，观察克隆形态，计算克隆形成率。克隆形成率一般为5%~ 10%。
四、抗生素
抗生素不是细胞培养中必需的成分。但在某些特殊情况下，培养液中需要添加适量的抗生素， 如果怀疑有污染，原始培训，新手操作不够熟练。常用的抗生素有青霉素、链霉素、卡那霉素和庆大霉素。常用青霉素剂量为100U/ml , 链霉素常用剂量为1000μg/ml。常配制成100 倍或200 倍， 分为小包装， 于－保存在20℃条件下。一次用小包装， 避免反复冻融 。
五、特殊添加因子
特殊的添加因子可以优化细胞培养的条件。原始培养细胞的接种密度应适当
当改善时，应尽可能使用营养丰富的培养液，如胎儿牛血清。这些都是一般的优化条件。细胞培养条件优化的原则是：根据细胞类型， 模拟体内环境， 添加不同的细胞生长因子和有利于细胞生存和增殖的添加剂。表1 它是细胞培养中常用的添加剂。
表 1 常用的细胞培养添加成分
| 生长因子类 | 其他因子 | 其他物质 |
| 表皮生长因子（EGF ) | 转铁蛋白 | 硒酸钠 |
| 血管内皮细胞生长因子(VEGF ) | 胰岛素 | 二硫基乙醇(2ME) ) |
| 神经生长因子( NGF ) | 可的松 | 佛波酯 |
| 肝细胞生长／分散因子( HGF/SF ) | 肝素 | 霍乱霉素 |
| 肥大细胞／干细胞因子( M/SCF ) | 牛／兔脑提取物 | |
| 神经肽内皮因子(ET-1， ET-2, ET-3) | 鸡胚提取物 | |
| 碱性成纤维细胞生长因子( bFGF ) |
一种细胞生长因子通常是各种细胞的丝裂原，如碱性FGF， 不仅是成纤维细胞的丝裂原，也是内皮细胞、角质细胞、黑素瘤细胞的丝裂原。EGF 能促进上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、平滑肌细胞等细胞的增殖。
在培养干细胞时，经常添加白血病抑制因子( leukemia inhibitory factor, LIF ) ，又称分化抑制因子( DIA ) ， 它是一种能抑制小鼠干细胞自然分化的分泌多肽。一般来说，可以使用纯化LIF 直接添加到培养液中或使用LIF 饲养层细胞表示载体感染。正常的STO 细胞也可以分泌。STO 细胞还分泌其他促进干细胞生长的因素。目前， 饲养层细胞仍在大多数实验室使用。LIF重组 与STO相比，来源方便 当细胞一起使用时，常用浓度为1000U/ml 。当与小鼠胚胎成纤维细胞一起使用时， 常用浓度为500U/ml 。
正常的体外培养细胞需要不同生长因素的选择性组合。通常是在现有经典的培养液配方的基础上添加不同的因素。目前有血管内皮细胞培养液、神经干细胞培养液、骨髓干细胞培养液、间充质干细胞培养液、小鼠心肌细胞培养液等多种特定的细胞培养液(Claycomo Medium) 等。
六、消化液
当细胞生长到一定密度时，需要代代相传。消化液使细胞脱离生长表面，分散成单个细胞。常用的消化液是0.25% 、0.125％胰蛋白酶和0.02％二乙胺四乙酸二钠(EDTA) 无钙镁PBS溶液 或者Hanks 溶液配制。它们可以单独使用，也可以按一定比例混合。最终浓度为0.05%的胰蛋白可用于大多数细胞的消化／0.02�TA 混合液。有些上皮细胞壁力强，需要高浓度的胰蛋白酶(0.25%) ）或延长消化时间，甚至需要37°C温育。如果细胞长时间(超过20分钟)仍不能脱壁，应采取分步消化措施，即将脱壁细胞移出离心管，加入完全培养液中和胰蛋白酶的作用，再加入新的胰蛋白酶消化未脱壁细胞。
其他用于细胞培养的液体
其他液体，如谷氨酰胺，也用于细胞培养HEPES 、丙酮酸钠、各种细胞生长因子、各种组织或细胞条件培养液、调节pH值 使用的5.6%NaHCO3等。
谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质所必需的氨基酸。当缺乏谷氨酰胺时，细胞会因生长不良而死亡。因此，各种培养液中含有大量的谷氨酰胺。然而，由于谷氨酰胺在溶液中非常不稳定，应及时添加。200 倍液体－20℃ 保存在冰箱中，使用前加入培养液，最终浓度为2mmoVL 。
HEPES pH值是一种非离子缓冲液 7.2~7.4 它具有良好的缓冲能力，在高浓度下可能对某些细胞有毒。HEPES 缓冲液可与低水平碳酸钠一起使用( 0.34g/L)共享以抵消额外添加HEPES 渗透压增加。10~25mmol/安全浓度范围L。丙酮酸钠可作为细胞培养的替代碳源。添加一些生长缓慢的细胞可以显著改善细胞状态。通常配制200 倍液，-20℃ 冰箱保存，使用前加入培养液，最终浓度为1mmol/L。
另外， 2－巯基乙醇(2-Mercaptoethanol, 2-Me) 对细胞生长起着非常重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清， 它能直接刺激细胞增殖。2-Me 活性部分是硫氢基，其中一个重要作用是将血清中含硫的化合物还原成谷胱甘肽，诱导细胞增殖，激活非特异性。避免过氧化物对培养细胞的损害。另一个重要的作用是促进分裂原和DNA的反应 合成，增加植物凝集素(PHA) 杂交瘤技术已广泛应用于淋巴细胞的转化。也开始用于一些难以培养的细胞。常用终浓度为5×10-5mol/L。常配制成0.1mol/L 储存液，每升培养液加0.5ml 。
