这种方法是最可靠、最便宜的， 但培养周期较长。常用于细胞和临床治疗细胞的支原体检查。
(一)材料和设备
1. 精氨酸肉汤培养基 蒸馆水按说明称量粉剂， 高压除菌(加20)％胎牛血清)。
2. 琼脂培养基支原体 按说明称量粉末，蒸锅水准备，高压除菌(加20％胎牛血清)。
3. 其他 超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管／皿、37°C 培养箱。
(二)操作步骤
1. 样品的储存。样品取材后，最好尽快检测。样品如24h 支原体检测在内， 可储存在2~8℃; 如果超过24h 样品应放置在那里－20℃ 以下保存。检测-20℃保存的样品应重新添加到对照培养细胞中，培养72h 之后，取上清直接进行接种检测。
2. 准备精氨酸肉汤培养基、支原体琼脂培养基(半流体)。
3. 将样品分别接种到10毫升 精氨酸肉汤培养基和半流体培养基(已冷却至36℃) ，每个培养基接种样品0.5~ 1.0ml. 每种样品接种6 支精氨酸肉汤培养基3 支半流体培养基。
4. 接种6d 后，取3 支精氨酸肉汤培养基样品0.5 ~ 1.0ml. 在精氨酸肉汤培养基中复种。
5. 36 ℃ 培养29d, 每隔3d 观察一次。记录实验结果。
(三)结果判断
培养结束时，如果精氨酸肉汤培养基有支原体生长，液体颜色会发生变化(粉色或黄色) 。
如果支原体生长在半流体培养基中，就会出现絮状沉淀
