原始培养是直接从有机体中去除细胞、组织或器官，使其在体外维持和生长。原始培养的特点是细胞或组织刚刚离开身体，它们的生物特征没有发生很大的变化，在一定程度上可以反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特征， 因此，用于药物实验，特别是对细胞活动、结构、代谢、无毒或杀伤的药物，是一种极好的工具。组织块培养法和消化培养法是常用的原代培养法。
(一)组织块培养法
许多实验室喜欢使用组织块培养方法进行原始培养，因为方法简单，细胞更容易生长。特别是心肌的培养，有时也可以观察到心肌组织块的跳动。细胞从组织块的边缘生长并覆盖培养皿或培养瓶后， 可以传代。
1. 设备材料
培养箱、冰箱、超净工作台／无菌室、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。
2. 操作步骤
（1） 在无菌条件下，取适量待培养的组织，放入小烧杯中， 适量Hanks 溶液清洗2~3 第二，去除组织块表面的血污。
(2)用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。
(3)再次使用Hanks 反复漂洗溶液， 直到液体不浑浊。当组织块下沉时，将烧杯倾斜，用小吸管尽可能去除Hanks。 溶液。
(4)含20%灭活血清和双抗溶液(200U/)ml 青霉素、200μg/ml 清洗链霉素)培养液，用吸管吸干，加入5ml 含20％血清培养液。
(5)用弯头吸管吸收组织小块，均匀放置在培养皿内表面，吸收多余的培养液，每个组织小块之间的距离为0.5cm 合适。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。
（6） 2~4h 之后，在超净工作台中，上述20个内容慢慢加入培养皿％血清及双抗溶液( 100U/ml 青霉素及100μg/ml 少量的链霉素培养液使组织块浸泡在培养液中。
(7)轻轻将培养皿和组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，无需观察。1~2 一周后，可以观察到细胞从组织块边缘生长，形成生长晕。
（9） 一般来说，如果培养液没有明显变化， 1 周换液1 第二次。当细胞长满整个培养皿的内表面时，可以代代相传地进行培养。
3. 需要解释和注意的问题
（1） 若采用培养瓶而非培养皿，则接种组织块千培养瓶底壁后， 轻轻翻转培养瓶，使瓶底在上，盖上瓶盖后轻轻放入37°C 的CO2 培养箱， 2~4h 之后，取出培养瓶，打开超净工作台上的瓶盖，仍然将组织块放在上面。在组织块对面的瓶壁上加入适量的培养液。然后，轻轻翻转培养瓶，使组织块浸泡在培养液中。盖上瓶盖，放回二氧化碳孵化器继续培养。
（2） 从培养皿表面游离的组织块可以丢弃。
（3） 如果使用玻璃培养瓶而不是新的塑料培养瓶，最好用鼠尾胶原蛋白包裹玻璃底表面，这不仅有利于组织块的粘附，而且能使细胞生长得更好。
(4)这种方法适用于各种组织的培养，操作人员也可以根据自己的实验需要和细胞类型进行修改。
(二)消化培养法
它与上述组织块培养方法有2个主要区别 点。首先，用酶制剂（最常用的是胰蛋白酶）处理组织块，去除细胞间质，使细胞相互分离，形成细胞悬液；二细胞的生长方式主要是单层( monolayer ) 。该方法的优点是单层细胞更容易吸收营养，排出代谢物，因此生长迅速，可以快速应用于实验研究；缺点是步骤繁琐，操作粗心，容易污染。另外，消化处理要恰到好处，否则会对细胞造成一定的损伤。
1. 操作程序
（1） 在无菌条件下， 待培养的组织1cm3左右，放入平盘或烧杯中，适量Hanks 溶液消洗3 第二，去除组织块表面的血污和结缔组织。
(2)用锋利的眼科剪刀反复剪断组织块，得到约0.5mm x 1mm 小块的大小。
(3)Hanks 溶液冲洗几次，等待组织块下沉，吸收Hanks 溶液。
(4)使用少量Hanks 溶液，将组织小块吸入带有无菌磁性搅拌器的锥形烧杯中，然后加入15~30ml 上述胰蛋白酶消化液。
(5)用橡皮塞将锥形烧杯盖紧，用锡箔密封。然后移至37。°C 培养箱内的电磁搅拌器。
(6)打开搅拌机的电源开关，使搅拌机旋转， 关闭培养箱，消化胰蛋白酶。
(7)在消化过程中，每隔一段时间将消化物吸收到载片上，观察光学显微镜下的细胞是否分散成单个细胞。如果大多数细胞分散，立即添加适量的Hanks 溶液，终止消化。通常需要消化10~20min 。
（8）先以100μm 过滤不锈钢筛，过滤未消化的组织块或大细胞组（如果获得的细胞较少，这些组织块可以继续消化以获得更多的细胞）。20μ 过滤不锈钢筛。
(9)低速(每分钟500~)取得的滤液 1000 转)离心5min，吸去上清液。并使用Hanks 溶液离心清洗1~2 第二，最后加入含血清的培养液，搅拌均匀，制成细胞悬液。
(10)用计数板计数，确定细胞悬液浓度，通常为1×105~3×105在培养瓶或培养皿中个接种植。
2. 需要解释和注意的问题
（1） 除胰蛋白酶外，通常使用1种酶来消化可视培养的细胞 型胶原酶消化睾丸支持细胞、血管平滑肌细胞和内皮细胞； 胶原酶消化大鼠腺垂体细胞等。
(2)没有不锈钢筛， 可用4 用层纱布代替，但纱布应提前高温高压灭菌。
（3） 严格来说，原代培养是指未经传代的细胞，但在实际工作中，人们往往是10 由于此时的细胞基本上保持了原始的生物学特性，因此代以内的细胞被用作原始的培养细胞。
（4） 从原始培养的操作步骤不难看出，原始细胞含有多种细胞成分，即异质型( heterogeneity) 因此，在设计实验和分析结果时，不要忘记这一因素。
