1.组织培养试剂
优化细胞生长条件。只使用新鲜准备的培养基和添加剂，并可能减少所使用试剂的变化。
基础培养基-目前使用的各种市场销售培养基(例如，RPMI 1640和DMEM)。其成分包括营养物质(氨基酸、葡萄糖)、维生素、无机盐和缓冲物质。有些成分非常不稳定，所以如果不新鲜添加，可能会出现问题。必须保存培养基的避光。因为已知有一些成分和缓冲物质，如HEPES，当暴露在光线下时会分解细胞毒性物质。此外，血清、添加剂、培养箱内的污染物、化学物质或真菌/细胞的污染也可能影响细胞生理。
2.细胞生长状态
密切观察你的细胞；确保它们处于良好的状态。在开始感染细胞之前，制定一个合适的板计划，以保持细胞密度从感染开始到结束的最佳状态。
细胞是影响结果一致性和质量的关键因素。
此外，还常用促有丝分裂刺激物(如病毒转化、生长因子、条件培养基和滋养细胞)激活原代培养细胞。
与悬浮细胞相比，贴壁细胞与悬浮细胞在传染效率方面存在显著差异。自然悬浮细胞(如HL) 60，Jurkat)很难转染。相反，天生就是贴壁的细胞(如HEK，CHO)能适应悬浮生长的条件。
3.载体DNA
检查纯化获得的载体质量。确定支持其正常功能的基因序列是否适合您的细胞系统。在测量您的细胞系统参数时，一定要选择一个您已知的功能控制载体。
载体的完整性——载体是否具有功能取决于其结构的完整性。传染效率受储存和处理过程中超螺旋结构与拉伸结构的比例、双螺旋中断、核酸酶降解以及物理压力的影响。
4.转染方案
转染复合物的制备，如转染试剂/DNA比、离子强度、缓冲液pH值、温度等，都会影响转染复合物的组成和功能。在TE缓冲液中，质粒可以在无菌水中稀释。若要使用市售转染试剂，应仔细阅读试剂提供的使用说明。需要对试剂提供商给予一定的信任；除非你有很好的理由支持你做出改变，否则你应该严格遵循他们推荐的感染计划。将转染复合物制备在无血清或其他蛋白质的培养基中；如果用于制备复合物的培养基含有血清，就会抑制转染。建议使用Entranster-H4000，培养基可添加抗生素和血清，有助于提高转染效率。
