细胞转染实验注意事项

1.如果是贴壁生长细胞，一般要求在感染前一天将胰酶处理成单细胞悬液，重新接种培养皿或瓶子。感染当天的细胞密度为70-90%(贴壁细胞)或20%。×106-4×106细胞/ml(悬浮细胞)最好在转染前4h更换新鲜培养液。
2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质、RNA等化学物质污染，OD260/280的比值应在1.8以上。
3.培养基中的血清
无血清培养基应用于DNA和阳离子脂质体试剂稀释液的准备，因为血清会影响复合物的形成。事实上，只要DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，就可以在转染过程中使用。
4.培养基中的抗生素
抗生素是影响感染的培养基添加剂。这些抗生素通常对真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的渗透性，使抗生素进入细胞。这降低了细胞的活性，降低了感染效率。此时，可以选择Entranster感染试剂和非脂质体试剂。培养基可以添加抗生素，以避免细胞感染。
5.设置阳性对照和阴性对照。
6.靶基因通常在24-48小时内在细胞内表达。靶基因表达的检测实验可以在24-48小时后进行，根据不同的实验目的。
7.如果建立了稳定的细胞系统，可以筛选靶细胞，并根据不同基因载体中所含的抗性标志选择相应的药物。常用的核心表达基因载体的标志物包括潮霉素和新霉素。