开始培养细胞后，我迫不及待地想写好每天的进度计划，甚至估计结果当天的日期。然而，生活总是充满了意想不到的
我的细胞，你为什么长得这么慢？？原因真的很丰富多彩...
如果你是整个实验室唯一一个遇到这个问题的人...
1. 检查你培养的细胞是否被污染。
(a)若培养细胞未添加抗生素(必须添加！)，细胞污染是不可避免的。
(b) 检测可能污染的方法和原因(无菌操作、细胞系污染、培养基污染)。
2 . 检查培养细胞的培养基和血液清。(例如，是否有不同的批次或不同的制造商)。如果你经常使用粉末或10X 储存液，现在购买的培养基被IX液体取代。
3 . 若问题与培养基无关，则很可能是细胞问题。
(a) 恢复另一个冷冻细胞，并与正在培养的细胞进行比较。两种细胞的培养应分开，以避免在培养开始时受到污染。然后按下（b)、（d)步法做排查：
(b) 计数代际培养的细胞，绘制生长曲线
与之前培养细胞的数据相比，检查是否有以下变化：
i ) 接种密度是否过低？ii) 细胞代代是否过于频繁。
iii)传代前细胞平台期是否过长。
(c) 胰蛋白酶或其他分离剂的批号是否更换？检查批号和供应商。
(d) 细胞在细胞分离过程中是否受到严重损伤？应检测：
i ) 胰蛋白酶(其它消化试剂)消化时间是否过长。
ii) 消化液的浓度和活性是否过高、过强。
iii)孵化器的温度是否过高，当胰蛋白酶消化时。
iv) 吹消化细胞时是否过于用力。
v) 如果添加了EDTA，细胞是否对EDTA过于敏感？
vi) 胰蛋白酶稀释是否错误。
但是，如果你不是唯一一个头疼的人，而其他人也遇到同样的困难，你必须检查共用设备和试剂。
(1)孵化箱温度和温度设置不准确。
(a) 自动调温器损坏。
(b）孵箱门开关过于频繁。
(c) 孵化器门没有关闭。
(d）风扇损坏导致散热不均匀。
(2) 孵化器的湿度无法维持
(a) 水盘中没有水。
(b) 在Petri培养皿中放置一定量的PBSA，每天称重，以检查蒸发率。
(3) 孵化器的二氧化碳浓度不允许
(a) 孵箱门开关过于频繁。
(b) 二氧化碳控制器有问题。
i ) 用预先校准的培养基监测箱内的PH值。
ii) 使用二氧化碳探头（carborite) 检测孵化器环境。
iii)用标准混合气重新标定零值和二氧化碳实际值。
如果这个问题在调查上述原因后仍然存在，则需要观察实验室是否发生了其他变化？细胞培养相关人员是否发生了变化？
实验者变了吗？
(1) 培养细胞人员是否增减
(2) 准备实验人员是否增减
(3) 实验人员的准备过程是否规范？
(4) 实验人员是否接受过系统培训？
(5) 实验空间和布局是否过于拥挤
是否改变了细胞培养所需的材料？
(1) 供应商变更？
(2) 细胞培养的操作过程有变化吗？
(3) 细胞培养的专用仪器设备是否完好
