血管内皮细胞在血管疾病、血管修复、肿瘤血管形成等基础研究和临床研究中得到了广泛的应用。体外培养的血管内皮细胞仍能保持血管内皮细胞的特征，如VIII因子、怀布尔等－帕拉德小体(Weibel-Palade body ) 、内皮细胞特异性抗原和IV 型胶原蛋白也可以在三维培养系统或特定诱导条件下形成血管样结构。血管内皮细胞在体外培养形成单层后，会表现出接触抑制和密度限制，停止生长。牛主动脉内皮、人脐静脉内皮、脑微血管、肺微血管、肝窦微血管及各种肿瘤组织中的血管内皮细胞已成功培养。以下是人脐静脉血管内皮细胞培养最常用的介绍。
(一)材料和设备
1. 设备 超净工作台、离心机、水浴锅CO2 培养箱、－10℃ 冰箱、－20℃冰箱。
2. 无菌材料 大培养皿、止血钳、静脉插管、500ml 大烧杯、消毒蒸馏水、50毫升 离心管、刻度管、弯头管、T25 培养瓶、广口试剂瓶、脐带(1)、保鲜液(0.01%) EDTA/DMEM, 4℃储藏）、高糖DMEM 培养液、胎牛血清、青／链霉素、D-Hanks 溶液、I 型胶原酶、VEGF 或ECGS 。
(二)操作步骤
1． 产科无菌脐带1 根， 将脐带放入含保鲜液的广口试剂瓶中4℃(避免污染)，并在最短的时间内将脐带放入实验室进行以下操作。
2. 脐带D用于超净工作台或无菌层流工作台-Hank 清洗溶液，将静脉插管插入脐静脉，用丝线结扎固定。
3. 用20ml 注射器将37℃ 的D-Hanks 脐静脉注入溶液，反复冲洗，直至清洗液无色澄清。
4. 用血管钳夹住脐静脉的另一端，并将0.2％的Ⅰ型或Ⅱ 型胶原酶(约20ml) 脐静脉通过静脉插管注入， 直到脐静脉完全充盈(静脉管中的空气排出)。
5. 将脐带放在37℃水的玻璃烧杯中°C 水浴条件下消化约20min(每5min) 抽吸／注入1 次）。
6. 酶液变成浊度(显微镜下可见大量游离细胞)时，在脐静脉中反复抽吸酶液冲击3 第二次吸出并置于50ml 离心管中。
7. 细胞悬液经350克 离心5min 之后，弃去上清液，用D-Hanks 溶液清洗两次，然后用350克清洗 离心5min 。
8. 抛弃上清液，将细胞溶解在8毫升 内皮细胞培养液(M l99 80ml、FBS 20ml 、PS 1ml 、L-Gln 2mM、ECGS 10mg/100ml 、Heparan 4000U/1 00ml 、Insulin mu在/100ml)中，接种预包2％明胶的T25 培养瓶中。
9. 细胞培养在37℃ 、5%CO2培养箱中， 24h 换液后，抛弃未粘壁细胞。之后，每2~3d 换液1 次， 当细胞结合时，消化和传代。
(三)细胞鉴定
成功的体外培养细胞需要纯度鉴定。可以提供测试其特性来识别，如表达Ⅷ 因子、Weibel-Palade 乙酰化低密度脂蛋白的摄入，表达内皮细胞特异性抗原CD31 等。
（四）小结
脐静脉内皮细胞是最标准的体外血管内皮细胞模型。它的培养相对成熟。然而，由于其代际有限，往往需要重复培养。此外，在培养脐静脉内皮细胞时，最好添加VEGF 或者ECGS， 通过刺激血管内皮细胞的增殖，可以增加传代数，获得更多的血管内皮细胞进行研究。
