化学词典告诉你三氯乙酸沉淀蛋白的原理和方法，三氯乙酸又称三氯醋酸，易潮解 ，溶于水、乙醇、乙醚 ，主要用于有机合成和制药、化学试剂和杀虫剂。三氯乙酸通常用于实验中蛋白质的沉淀。它的原理是什么？如何操作？
三氯乙酸沉淀蛋白原理
① 不溶性盐在酸性条件下与蛋白质形成；
② 蛋白质变性剂作为蛋白质变性剂改变蛋白质构象，暴露出更多的疏水基团， 使其聚集沉淀；
③ 随着蛋白质分子量的增加，其结构复杂性和致密性越大，TCA 它可能渗透到分子中，很难完全去除。在电泳前加热样品时，蛋白质结构可能会酸水解形成碎片，随着时间的推移，这种效果越来越明显；
④ 电泳图谱显示，BSA、HSA 由于TCA，单体谱带有明显的宽度现象 SDS的组合 偏离蛋白质的结合量，导致蛋白质带来的电荷不均匀，导致迁移率不一致。
三氯乙酸沉淀蛋白的方法
1)加1/4体积 TCA DOC在蛋白质成分(在1.5-ml聚丙烯微离心管中)中，最终浓度为TCA的20%(w/v)。震荡混合。
2)冰上解育20~300 min。
3)微离心机，室温离心15 min。如果可见沉淀物，则为粘稠的黄褐色胶体。用精细的巴氏吸管吸出上清。尽量去除尽可能多的上清。如果采用100ul样品进行沉淀，则可见沉淀物。
4)增加3倍体积(原样体积丙酮(室温)。样品在室温下静置约10倍 min, 使TCA 丙酮溶解DOC。
5)室温离心15 min。当时，沉淀物的大小和物理特性与一点灰尘相似。大约有10个ug或更多的蛋白质可以看到。有时，白盐（如KCL等）沉淀物会被获得。用非常精细的巴氏菌吸管清除。沉淀物在冰上干燥10 min(打开1.5-ml离心管盖)。干沉淀物可长期存在（>1 在-20℃保存一个月。
6) 用含 2-硫基乙醇样品缓冲液（lx)(用于标准的小型平板凝胶装置 6ul) 溶解沉淀物。还有少量的TCA 溴酚蓝的残留物会变黄。这并不重要，因为电泳有足够的缓冲能力来中和痕迹 TCA。如果沉淀物中有残留物 KCl, 在沉淀的蛋白质中加入样品缓冲液，会形成絮状白沉淀(十二烷基硫酸钾)。如果十二烷基硫酸钾沉淀，样品很难添加 SDS 凝胶，但一旦样品添加到凝胶上，电泳就会进行得很好。
7) 如果需要分子量标准参考，则不能使用 2-巯基乙醇的 lxSDS 样品缓冲液将蛋白质分子量（MW) 标准制成每毫升含量 0.5 mg 储存总蛋白。分为小等分试样 (50ul) 储存在-20℃。银染可取 2ul 分子量标准 4ul 含 2-硫基乙醇样品缓冲液，最终体积为6ul。
