为什么荧光原位杂交备受关注?

2023年07月27日 阅读量:86

荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization FISH)它是一种新兴的分子细胞遗传技术,是20世纪80年代末在原有放射性原位杂交技术的基础上发展起来的非放射性原位杂交技术。目前,该技术已广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究等领域。

荧光原位杂交技术检测乳腺癌

一、实验原理:

FISH的基本原理是将已知标记的单链核酸作为探针,与待检材料中未知的单链核酸结合,形成可检测的杂交双链核酸。由于DNA分子沿染色体纵轴线性排列,探针可以直接与染色体杂交,从而在染色体上定位特定的基因。

二、探针分类:

1)染色体特异重复序列探针,如α卫星、卫星III类探针,其杂交靶位通常大于1mb,不包括散在重复序列中,与靶位紧密结合,杂交信号强,易于检测;

2)全染色体或染色体区域特异性探针由染色体或染色体某一区段上极其不同的核苷酸片段组成,可通过从克隆到噬菌体和质粒的染色体特异性大片段获得;

3)特异性位置探针由一个或多个克隆序列组成。

可采用直接和间接标记的方法进行探针荧光素标记。间接标记是用生物素标记DNA探针。杂交后,用莲藕联中的荧光素亲和素或链霉素亲和素进行检测。同时,亲和素-生物素-荧光素复合物可以用来放大荧光信号,从而检测500bp的片段。直接标记法是将荧光素与探针核苷酸或磷酸戊糖骨架直接结合,或将荧光素核苷三磷酸掺入缝隙平移法标记探针。直接标记法在检测过程中步骤简单,但由于信号无法放大,其灵敏度不如间接标记法。

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